缓冲液或流动相添加剂不足导致的峰形问题

缓冲液或流动相添加剂不足会导致峰拖尾。

缓冲液主要用来使样品处于（保持）恒定的离子化状态，从而稳定保留情况（时间），并在Z大程度上减少因离子相互作用而导致的峰拖尾现象。

缓冲液还可YZ硅胶表面上的硅烷醇基团的电离现象（的硅醇基离子化）。

但是对于低纯度硅胶材料来说，由于其硅烷醇更容易被电离，所以它的挑战性更高（当然，这对于低纯度的硅胶材料是更大的挑战，因为可能更多硅醇基会离子化的）。

添加剂浓度对峰形的影响如图2所示。

在这种情况下，三氟乙酸（TFA）会作为蛋白质样品成分的离子对试剂，也会产生（可提供）低pH流动相以YZ硅烷醇电离。

通常，0.1％TFA可以（作为添加剂）用于蛋白质和肽分离。

如图2a和b所示，该浓度足以在Z大程度上改善高纯度和中纯度硅胶柱的拖尾现象。

然而，如果TFA浓度下降（降低）十倍（图2c，d），两个相（两个固定相）的拖尾均会随之增加。高纯度硅胶仍可（仍然）保持可接受的峰形，但中纯度色谱柱的峰拖尾则无法接受。

缓冲液和其它流动相添加剂的一个共同特征是：作用效果（例如峰拖尾的减少、保留时间的稳定）会从低浓度开始（开始显现），并随着浓度的增加而继续作用（增加），但会逐渐（趋平）维持在一个稳定水平。

稳定水平之下的添加剂浓度，可以保持稳定的运行；浓度过高会产生（可能导致）溶解性问题。

对于大多数应用来说，10-25mM内的添加剂已经足够了，但Z好根据具体情况确定。

图2. 缓冲液浓度对峰拖尾的影响。

0.1％TFA与（a）高纯度（b）中纯度硅胶柱；0.01％TFA与（c）高纯度和（d）中纯度硅胶柱。

色谱柱：250x4.6mm, 5m, C18 300Å；

流动相：A: 0.1%或0.01%的TFA溶于水中；B: 0.1%或0.01%的TFA溶于ACN；5-70% B，30分钟；

流量：1.0 mL/min, 280nm。

成分（保留顺序）：核糖核酸酶A、细胞色素C、全铁转铁蛋白、脱辅基肌红蛋白。