羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)是目前ZJ有特征的混合模式填料之一,由于其结晶的化学结构、立体构造的特点,羟基磷灰石与抗体的Fab片段、Fc片段可发生相互作用。所以至今为止,羟基磷灰石在抗体及蛋白质的纯化、多聚体和残留核酸的去除等工艺中,作为精细纯化步骤的填料被广泛使用。并且,该填料兼具离子交换和金属亲和力,具有其他填料不具备的特殊分离能力,能够为生物大分子分离纯化提供独特的解决方案。
羟基磷灰石纯化工艺的“新选择”!
Ca++Pure-HA羟基磷灰石填料由东曹公司采用了优质ding级材料,通过专有工艺研发生产的高纯度的10nm×100nm六边形截面晶体,凝聚成球状颗粒。经过高温烧结,提高了机械强度和化学稳定性,能够满足工业规模的纯化要求。Ca++Pure-HA强大的特性使其可以在高流速和大型层析柱中重复循环使用。
Ca++Pure-HA的应用范围
分离抗体及蛋白质的多聚体、异构体、分解物、电荷异质体等目标产品内源性杂质
分离DNA、HCP、病毒等来自生产工艺或混入的外源性杂质
适用于ZZ(精纯)步骤中的分离纯化
酸性条件下各填料稳定性对比
上图显示的是,在装填有高吸附型羟基磷灰石Ca++Pure-HA、市售高吸附型 (B公司Type I) 和高耐久型 (B公司Type II) 羟基磷灰石填料的层析柱中,连续用弱酸性蒸馏水通液时,层析柱的理论塔板数的变化情况。
市售品在大约80~90小时通液后,理论塔板数下降10%以上。与之相比,Ca++Pure-HA的理论塔板数虽然也会缓慢减少,但在约160小时之前,理论塔板数仍保持在90%以上。也就是说,Ca++Pure-HA属于高吸附型,且在酸性条件下的耐久性更好。
单克隆抗体多聚体分离实例
下图是使用Ca++Pure-HA精纯IgG样品的分离实例。配合使用氯化钾洗脱缓冲液可以有效去除mAb中的聚集体和降解物。从分析结果中可以看到,单体峰和多聚体峰中间的分辨率较高。
随后,对纯化后的IgG样品进行尺寸排阻色谱分析。结果显示,单克隆抗体中多聚体的总量从18.8%降到了1.1%,显著降低。
优异的耐碱性能
从下图中可以看到,Ca++Pure-HA在0.5 mol/L的NaOH溶液中具有良好的耐碱性,即使超过65个CIP循环后,动态吸附载量也没有明显降低。
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