葛仙米属于蓝藻门念珠藻科，是一种具有较高经济价值的可食用蓝藻。葛仙米多糖是由葡萄糖、半乳糖和葡萄糖醛酸等多种单糖组成，具有抗肿瘤、抗凝血与抗 菌等作用。研究表明葛仙米多糖主要为大分子量多糖，且该多糖部分没有蛋白和核酸的吸收，可采用HPLC-RI方法进行定量分析。
本次分享的应用中，作者采用TSKgel G6000PWXL尺寸排阻色谱柱及示差折光检测器 (RI) 检测建立了一套高效液相色谱快速、准确直接测定葛仙米中大分子量多糖含量的方法。
01 分析条件
色谱柱：TSKgel G6000PWXL（7.8 mmI.D.×30 cm, 13 μm）
流动相：0.05 M 磷酸二氢钠+0.15 M硝酸钠（pH 7.0）
流速：0.5 mL/min
进样体积：100 μL
柱温：30 ℃
检测器：RI
02 测定方法
将经过预处理的葛仙米多糖提取液按标准溶液的测定条件测出峰面积。根据线性方程和以下公式算出葛仙米多糖的含量。多糖含量=D/M×100%，其中，D为根据线性方程算出葛仙米多糖的质量体积比（mg/mL），M是原料质量体积比（mg/mL）。
03 分析结果
图1 标准品和样品对比色谱图
图2 纯水和样品紫外280nm检测下对比谱图
04 结果与讨论
以醇沉的葛仙米多糖为标准品，在0.015625-5.0 mg/mL内，峰面积与进样量作标准曲线得到线性方程Y=1995695.548X-170.597，峰面积与样品浓度，线性关系良好（R2=0.999）,定量上限为10 mg/mL、下限为0.078625 mg/mL。
HPLC法测定葛仙米多糖与苯酚硫酸法相比，优势在于可以测定特定分子量范围的多糖。采用TSKgel G6000PWXL尺寸排阻色谱柱，能够在大分子多糖无蛋白和核酸干扰的情况下更加准确地进行定量。
参考资料：
1. 苏攀峰, 唐庆九, 陈盛 等. 高效液相色谱法测定葛仙米水溶性多糖含量. 上海农业学报. 2020, 36 (1):105-110
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