液相色谱法检测苯甲酸山梨酸糖精钠的疑难详解

液相色谱法检测苯甲酸山梨酸糖精钠的疑难详解 苯甲酸山梨酸糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸山梨酸的检测参照GB/T5009.29-2003，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-2003，即可开展实验 苯甲酸山梨酸糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸山梨酸为着ZD，从样品前处理检测仪器的选择超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述 2 样品前处理的注意事项 GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸山梨酸糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理 食品样品往往含有大量的油脂蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂蛋白质，且不影响待测物组分的回收率 GB/T5009.29-2003使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉奶粉月饼等高油脂高蛋白样品则沉淀效果不理想如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过Z理想的沉淀剂） 具体操作步骤如下： 取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁溶液， 9.50mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45m微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定 用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限 3 检测仪器的选择 虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测原因如下： 3.1 液相色谱法所用的样品处理方法远比气相色谱法简单，且不需使用有机试剂尤其对于高油脂样品（如月饼）若采用碱化－排油－酸化－提取－挥干－溶解等步骤，再上气相色谱仪检测，工作量大，试剂毒性也大，且结果由于处理步骤太多而难以保证准确 3.2 用液相色谱法还可同时完成糖精钠项目的检测，而气相色谱法只能做苯甲酸山梨酸的检测 3.3 液相色谱仪所用的紫外检测器比气相色谱仪的氢火焰检测器灵敏，可进行更低含量的检测如用二极管阵列检测器，还可辅助定性，这更是气相色谱氢火焰检测器不可比拟的 4 选用气相色谱仪时的注意事项 GB/T5009.29所用的气相色谱柱为 5％DEGS＋1％磷酸固定液的60－80目 Chromosorb W AW，这种柱有性能稳定重复性好保留时间稳定的优点，但同时也有稳定时间较长的缺点 该柱的适用的样品提取溶剂为石油醚或，如果用甲醇或乙醇，则溶剂峰拖尾效应较大，对山梨酸的测定有影响 如用毛细管柱，能取得更好的峰形和灵敏度，但其稳定性及特异性不如填充柱一般可用非极性毛细管柱，0.530mm内径，10－15m长度色谱条件可能需用程序升温 在气相色谱仪上的出峰次序为先出山梨酸，后出苯甲酸 糖精钠不能直接用气相色谱进行检测，必须衍生化后才能汽化进样 Waters515液相色谱仪