我们都知道,在光纤记录实验中,许多问题直接决定了数据的准确性和可重复性。为了让大家的实验操作更顺利、成果更丰硕,瑞沃德专家针对大家的咨询作出了详细解答。
光纤记录和光遗传的一分多光纤是否通用?
光纤记录检测不到信号的原因?
...
常见问题解答
不通用。
光纤记录一分多光纤:物理意义上仍为多根光纤,只是合束端捆在一起,但软件上会显示多个光斑。
光遗传一分多光纤:合束端为1根光纤,分束端将光纤均分。
因此,光纤记录和光遗传的一分多光纤不通用。
光纤记录一分二光纤示例图
光纤记录一分七光纤合束端实物图
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1.仪器连接及参数设置
光纤与仪器的连接或陶瓷插针和光纤末端的连接有问题,有空隙。
漏在牙托水泥外部的插针接头部分太短,不够与光纤通过套管连接。
光纤端面有脏污也会影响信号检测,可用酒精擦拭光纤端口,将脏污清理干净。
2.病毒问题,建议做完所有实验后将老鼠灌注取材切片,观察病毒表达与陶瓷插针的相对位置
病毒表达不佳,可能该批次病毒活性低,表达效率低,转染效果差,甚至未表达。
病毒表达较好,但陶瓷插针植入脱离病毒区域,无法检测到相应荧光信号。
病毒表达较好,插针埋植至表达区域,但是两者都不在目标脑区位点,刺激范式不匹配,检测不到信号波动。
检测的神经末梢(投射)太稀疏,信号非常非常弱,可以考虑使用增强末梢表达的病毒。
反复冻融会降低病毒滴度,从而影响病毒转染效率。因此光纤记录实验中,病毒应即拿即用,避免反复冻融。
3.陶瓷插针埋植位置
病毒注射与陶瓷插针植入可以在同一个手术进行,避免二次手术对小鼠造成伤害。
选择合适的夹持器,以满足不同深度及多位点的植入手术。
定期查看定位仪操作臂与夹持器的固定情况,防止角度偏差。
病毒注射表达区域与陶瓷插针的植入位置需要保持接近。病毒表达较好,但陶瓷插针植入脱离病毒区域(病毒所在区域就是荧光蛋白表达区域)也会影响荧光信号的检测。光纤记录实验埋植位置建议在病毒注射位点上方 50-100 μm 处。光遗传实验埋植位置建议在病毒注射位点上方约 100-300 μm 处。
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光纤记录睡眠研究应用实验时,脑电肌电使用2EEG/1EMG系统进行信号采集,但只有EEG2有信号,EEG1基本上是噪声,检查过硬件连接和系统设置都没有问题,这是什么原因造成的?
光纤记录嗅觉研究应用实验时,嗅觉训练过程注意事项?
1.行为学实验操作应尽可能轻柔操作,建议于实验开始前三天对小鼠实施抚摸陪同玩耍行为,如使用棉麻手套则训练全过程不更换该手套。
2.小鼠禁水时长应适度,时长过短会导致禁水程度不够小鼠不配合训练,时长过长会导致小鼠脱水严重小鼠状态不佳无法配合训练,更重要的是有损小鼠健康,不符合动物实验伦理原则。
3.实验需在安静环境下进行,实验过程中实验人员应保持安静,不可高声谈论,不可用力关门发出尖锐噪声等。
4.在结束每天的训练后给小鼠提供自由饮水0.5-1.0小时很重要,有利于维持小鼠健康状态及保持小鼠每次训练禁水状态的一致性。
5.建议在每次训练开始启动程序测试水嘴出水,确保小鼠放入行为箱后即顺利进入训练流程。
6.训练全过程应保持水嘴奖励侧选择的一致性,始终使用双侧水嘴或始终使用某单侧水嘴作为奖励侧。
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篇幅有限,如果您在实验过程中遇到上述未提及的其他问题,别担心!
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b. 实验流程和注意事项
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