BS-8224 猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒

   猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒实验使用说明书

   BS-8224  猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒

   一、实验目的

   本试剂盒用于体外定量检测猪血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及相关液体样本中干扰素-γ（IFN-γ）的含量。

   二、实验原理

   采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）。微孔板包被有猪IFN-γ特异性捕获抗体，样本或标准品中的IFN-γ与捕获抗体结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经彻底洗涤后，加入底物TMB显色，TMB在HRP催化下转化为蓝色，酸终止后呈黄色。颜色的深浅与样本中IFN-γ浓度呈正相关，通过酶标仪在450nm波长测定吸光度（OD值），计算样本浓度。

   三、试剂盒组成

   预包被抗体的微孔板（96孔/48孔配置）

   标准品（S0-S5，浓度梯度：0、2.5、5、10、20、40pg/mL）

   HRP标记的检测抗体

   20×洗涤缓冲液

   底物TMB

   终止液

   样本稀释液

   封板膜

   说明书

   四、样本处理

   1.血清样本

   室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清。

   避免溶血，溶血样本不宜检测。

   短期保存于2-8℃，长期保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

   2.血浆样本

   使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃、1000×g离心15分钟，取上清。

   保存同血清样本。

   3.组织匀浆

   用预冷PBS（0.01M，pH7.4）冲洗组织，去除血液，称重后剪碎。

   按1:9重量体积比加入PBS（可加蛋白酶yizhi剂），冰上匀浆，超声破碎或反复冻融裂解。

   5000×g离心5-10分钟，取上清。

   4.细胞培养上清

   1000×g离心20分钟，取上清。

   保存同血清样本。

   五、操作步骤

   1.试剂准备

   洗涤缓冲液：蒸馏水按1:20稀释20×洗涤液，混匀备用。

   标准品稀释：按说明书梯度稀释，避免气泡。

   2.加样

   从铝箔袋取出平衡至室温的板条，设标准品孔、样本孔、空白孔。

   标准品孔加50μL不同浓度标准品，样本孔加10μL样本+40μL样本稀释液，空白孔不加。

   3.温育

   每孔加100μLHRP标记检测抗体，封板膜封住，37℃恒温箱温育60分钟。

   4.洗涤

   弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟，甩干，吸水纸拍干，重复5次。

   5.显色与终止

   每孔加90μLTMB底物，37℃避光显色10-20分钟。

   加50μL终止液终止反应（蓝色变黄色），立即测定。

   6.测定

   酶标仪450nm波长测OD值。

   六、注意事项

   试剂保存‌：2-8℃避光保存，有效期6个月；使用前室温平衡20分钟。

   操作规范‌：

   避免酶标板干燥；加样和洗涤后尽快下一步操作。

   使用一次性枪头、EP管，防止交叉污染。

   浓缩试剂使用前离心，使管壁液体集中底部。

   样本要求‌：

   避免NaN3，因yizhi HRP活性。

   样本稀释5倍，结果乘以5为实际浓度。

   质量控制‌：

   标准品和样本建议复孔检测。

   每次实验需做标准曲线。

   七、结果计算

   以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。样本OD值代入曲线计算浓度。

   八、技术要点

   充分混匀试剂，避免气泡；使用微量混匀器轻柔混匀。

   洗板时，手工洗板需彻底拍干；自动洗板机可设置浸泡程序或翻转微孔板。

   显色底物避光保存；终止液添加顺序与显色底物一致。

   猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！本生试剂盒