经过多日的精心培养,终于到了验收培养结果的时刻,然而这些脆弱的细胞却被微生物悄然入侵,实验的努力瞬间化为泡影,细胞污染问题成为细胞培养实验的第一大杀手。
PART 01- 观察培养基状态
观察培养基颜色,正常培养基颜色为红色或粉色,若细胞被污染培养基会呈现黄色或橙色
观察培养基是否澄清,若培养基出现浑浊并伴随有絮状物,可能指示细胞被污染
PART 02- 显微镜观察
细胞污染主要分为细菌,真菌和支原体污染
1. 实验用培养基,培养皿等仪器耗材消毒不完全
使用高压灭菌器或化学消毒用品对培养皿等耗材进行严格的消毒灭菌,使用前检查培养基是否浑浊。培养基切忌反复冻融,不避光保存。
2. 超净台或安全柜紫外消毒不完全,操作平台摆放混乱
若操作平台拜访混乱会阻碍紫外对操作空间的灭菌。实验前将本次需要使用的仪器耗材放进超净台或安全柜,打开紫外最少照射30分钟,操作时全程佩戴口罩、手套,并靠近酒精灯火焰,实验结束后将多余仪器耗材取出。
3. 培养箱长时间不清洁消毒
由于培养箱内的培养环境适合微生物的生长繁殖,如果长期不进行清洁消毒会造成污染和交叉感染,需要定期对培养箱进行清洁和消毒
可用75%酒精擦拭培养箱内壁,包括培养箱的平板、腔体以及储水槽等
直接对培养箱内部进行高温灭菌,培养箱一般配备干热灭菌或湿热灭菌模式,针对不同的污染物类型可选择不同的灭菌模式
4. 细胞本身原因
细胞密度过低时,细胞间的相互作用减弱,细胞的抵抗力下降,更容易受到微生物的侵袭。同样的细胞传代次数过多,细胞的活力和抵抗力会逐渐下降,同时培养基中的营养物质也可能被消耗殆尽,导致细胞更容易被污染。
目前细胞培养实验可使用CO2培养箱,培养温度通常维持在37℃,模拟人体内部环境,CO2浓度和湿度均可根据实验条件选择,CO2培养箱的这些特点使其成为细胞培养、组织工程、生物制药等领域中不可或缺的实验设备。
天美生命科学实验室设备的CO2培养箱DynaCell 190i以其精确的温度和CO2浓度控制、高湿度维持能力、无菌操作环境、用户友好的操作界面、节能设计以及可靠的安全特性,为用户提供了一个稳定、高效、便捷的细胞培养解决方案。
▲DynaCell 190i CO2培养箱
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