如何高效无血清培养CAR-NK细胞

和T细胞相比，目的基因导入NK细胞具有更大的挑战性，因此其开展的临床实验要远低于CAR-T和TCR-T，但无论如何，CAR-NK也将会是肿瘤免疫治疗领域发展的新方向。

对于异体CAR-NK细胞治疗，细胞的培养总是细胞制备工艺中比较重要及花费时间最长的步骤。

本研究采用Xuri W25采用无血清培养基培养CAR-NK细胞，经过共18天的培养获得4e10个总活细胞数。NK细胞纯度＞98%，NK细胞被有效激活，CAR-NK比例为59%。

以下为该CAR-NK细胞培养实验的具体描述。

PBMC细胞经磁珠分选，获得高纯度的NK细胞。激活后的NK细胞在细胞培养板或培养瓶中静置培养，放于37℃，5%CO2培养箱进行预扩增7天左右（期间采用携带CAR基因的病毒对NK细胞进行基因转导）。

当预扩增达到一定细胞量时，按照Xuri W25操作规程，将预扩增的细胞接种至Xuri 2 L一次性细胞培养袋中，细胞密度维持1e6-1.5e6 cells/mL，根据细胞的生长逐渐补加新鲜培养基，直至总培养基达到1 L后，开始启动灌流培养。培养过程中取样检测细胞密度、活性、表型及CAR阳性率的水平，灌流速率根据细胞密度的变化进行调整，同时检测细胞悬液中营养物质如葡萄糖及代谢废物如乳酸代谢水平的变化。

Xuri W25摇摆速度及角度根据培养袋中体积及细胞密度的变化进行调整。

总共培养18天后，活细胞总数达到4.2e10 cells，活率＞97%，细胞扩增倍数为3866倍。培养结束时，NK细胞的纯度＞98%，CAR-NK的比例为59%。

培养结束后，采用Sefia S-2000细胞处理系统，使用FlexCell程序对细胞进行收获。

经洗涤浓缩，细胞的活率约下降2.7%，优化离心条件及清洗液组分可改善对细胞活率的影响。

综上，采用波浪式反应器Xuri W25通过优化培养过程中生物反应器的培养参数及灌流策略能够可以高效培养用于异体化治疗的CAR-NK细胞，并且能够维持比较高的NK细胞纯度及CAR转导效率。高效自动化的同时还能够对过程进行监控。