“苏丹红”是一种化学染色剂,并非食品添加剂。它的化学成份中包含一种具有萘环结构的复杂化合物,该化合物具有偶氮结构。这样的化学结构带来的化学性质决定了它具有致癌性,对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。在《国务院办公厅关于印发2010年食品安全整顿工作安排的通知》中也明确规定了苏丹红作为食品添加中的禁用物质,是每年全国食品安全监督抽检中的必检项目。本次实验参照标准《GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》对辣椒粉、辣椒油和辣椒酱等样品中进行不同浓度的加标验证,对实验前处理过程进行了适当优化,实验结果稳定,4种苏丹红的加标回收率均能满足标准要求。
样品提取
a 红辣椒粉等粉状样品
称取试样1g均匀样品于50mL离心管中,加入20mL正己烷,振荡提取10min,超声5min后,4000r/min离心5min,上清液收集于另一离心管中,残渣用10mL正己烷重复提取1次,4000r/min离心5min,合并所有正己烷层,40℃氮吹至5mL以下,剩余样品涡旋混合均匀后作为待净化液。
b 辣椒油等油状样品
称取1g均匀样品于15mL离心管中,加入3~5mL正己烷,振荡提取5min后作为待净化液。
c 辣椒酱等含水量较大的样品
称取10g均匀样品于50mL离心管中,加入30mL提取液(正己烷:丙酮=3:1),涡旋混匀,振荡提取10min,4000r/min离心5min,转移正己烷层,下层用10mL正己烷重复提取2次(共20mL),4000r/min离心5min,合并所有正己烷层,加入10g无水硫酸钠脱水,40℃氮吹至干,加入5mL正己烷复溶完全后作为待净化液。
注:(1)辣椒酱类含水量较大的样品的提取液加入无水硫酸钠脱水后,无水硫酸钠残渣需要用5mL正己烷洗涤两次。(2)样品均需重复提取1~2次,避免目标物损失。
净化(Copure 苏丹红专用柱,1g/6mL)
活化:固相萃取柱使用前用10mL正己烷活化小柱
上样:待净化液全部转移至小柱中,弃去流出液
淋洗:用5mL正己烷淋洗,弃去流出液;(注:上样淋洗过程尽量不要使柱床干涸)
洗脱:用30mL 含10%丙酮的正己烷洗脱,收集洗脱液于50mL离心管中,40℃氮吹至近干,加入5mL丙酮溶解残渣,超声2-3min,涡旋复溶。过PTFE滤膜,上机测试。
高效液相色谱-串联质谱法 取空白基质样品,按照1.1、1.2、1.3的制备方法处理制成空白基质溶液。精密量取适量农残混合标准溶液,用空白基质溶液定容至1mL,精密加水0.3mL,混匀后得到5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的标准工作溶液。
标准系列工作液
吸取适量中间液,用乙腈逐级稀释,得到浓度为0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL。根据样品浓度选择至少5个点建立校准曲线。
色谱柱:Copure? C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)
仪器:ThermoFisher U3000液相色谱仪
流动相:A:0.02%磷酸水;B:乙腈
洗脱方式:A:B=5:95 等度洗脱
流速:1 mL/min,柱温:30 ℃,进样量:20μL
检测器:紫外检测器,检测波长:478 nm(苏丹红Ⅰ)、520nm(苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ)
0.5μg/mL曲线苏丹红的液相色谱图
加标浓度为1mg/kg时辣椒粉中苏丹红液相色谱图
加标浓度为1mg/kg时辣椒油中苏丹红液相色谱图
加标浓度为0.5 mg/kg时辣椒酱中苏丹红液相色谱图
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