在生物分子纯化与分析的前沿领域,?KTA系统以其卓越的性能成为科研工作者的重要工具。而当?KTA与更多检测器联用时,为研究开辟了更多可能性,解锁了前所未有的应用场景。
?KTA系统:生物分子纯化的基石
?KTA系统作为生物分子纯化技术的代表性设备,经过不断革新,已成为该领域广泛应用的技术支撑。它能够高效分离和纯化多种生物分子,涵盖蛋白质(如天然蛋白、重组蛋白、抗原抗体等)、多肽、寡核苷酸、质粒、病毒及小分子等,广泛应用于人类、动物、植物和微生物来源的样品。
?KTA系统集成了先进的液相层析技术、智能软件及多样化的预装柱。高精度钛合金柱塞泵系统可实现优异的梯度重复性和自动缓冲液配置,满足从实验室研究到中试制备的不同需求。标配的紫外检测器基于朗伯比尔定律,可在特定波长下(如280 nm检测蛋白,或联用280 nm和260 nm检测蛋白与核酸混合物,214 nm测定肽键等)提供高灵敏度、抗干扰的检测结果。
第三方检测器:拓展检测维度
通过专用数据转换盒“I/O-box E9”,?KTA系统可将第三方检测器的信号转化为UNICORN软件可识别的信号,从而扩展其实时监测能力。以下是几种常见的第三方检测器及其应用:
图1:连接第三方检测器专用“神器”——I/O-box E9
荧光检测器
(Fluorescence Detector, FD/FLD)
用于检测具有荧光特性的化合物,尤其适用于带有荧光标签的重组蛋白。其高灵敏度和选择性可有效区分目标蛋白与杂质。
? 动态光散射 ?
(Dynamic Light Scattering, DLS)
通过分析颗粒布朗运动引起的散射光波动,测定粒径分布及生物大分子的聚集状态,为胶体稳定性和分子相互作用研究提供关键数据(注:相关结果在该检测器对应操作软件中进行计算)。
? 多角度激光光散射检测器
(Multi-Angle Laser Light Scattering, MALS)
与尺寸排阻层析(SEC)联用,可精确测定生物分子的绝对分子量、形状及复合物组成,广泛应用于抗体偶联药物、AAV空壳率分析等领域(注:相关结果在该检测器对应操作软件中进行计算)。
??蛋白质的表征:?KTA系统外接多角度激光光散射检测器(MALS),样品经由分子筛和离子交换进行精细分离后,再通过UV检测器和MALS检测器,可得到目标蛋白的摩尔质量、流体力学半径等关键参数。
IEX-MALS(Mono Q、Mono S,目前还可使用Capto HiRes Q及Capto HiRes S)还能克服SEC-MALS (Superdex系列、Superose系列分子筛)的部分局限性,如分离具有相似分子质量的蛋白质群体、分离效果不佳的寡聚物以及短肽等,对异质样品也能进行分析,为蛋白质表征和质量评估提供了有价值的方法。
图2:?KTA与多角度激光光散射检测器联用
? 示差折光检测器 ?
(Refractive Index Detector, RID)
作为通用型浓度检测器,适用于无紫外吸收的化合物(如多糖、脂肪烷烃等),为样品组成分析提供补充信息。
适应多样化研究需求
无论是基础科研中的分子机制探索,还是生物医药领域的药物研发与质量控制,?KTA与其他检测器的联用均展现出强大的适应性。科研人员可以从分子大小、形状、聚集状态、荧光特性等多维度获取数据,深入解析生物分子的结构与功能关系。其灵活的组合方式能够满足不同场景下的分析需求,推动相关领域的研究不断突破。
?KTA与第三方检测器的联用为生物分子研究注入了新的活力。随着技术的进步,这一模式将在更多领域发挥重要作用,助力科研工作者取得更多突破性成果。
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货号 | 名称 |
29011361 | I/O-box E9 |
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参考文献:
Amartely, H., Avraham, O., Friedler, A. et al. Publisher Correction: Coupling Multi Angle Light Scattering to Ion Exchange chromatography (IEX-MALS) for protein characterization. Sci Rep 9, 6182 (2019).
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