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WGBS还在用超声打断?这款酶破解甲基化DNA片段化难题

来源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 更新时间:2025-12-15 17:00:23 阅读量:16
导读:WGBS还在用超声打断?这款酶破解甲基化DNA片段化难题




全基因组甲基化测序(Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS)是表观遗传学研究的核心技术之一,通过亚硫酸氢盐处理将DNA中未甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),而甲基化的C保持不变,结合高通量测序可实现单碱基分辨率的甲基化图谱绘制。作为检测5-甲基胞嘧啶的“金标准”,WGBS能全面解析基因组范围内甲基化模式的动态变化,为肿瘤发生机制、发育生物学及复杂疾病研究提供关键表观遗传学证据,尤其在肿瘤早筛、细胞重编程等场景中具有不可替代的应用价值。


DNA甲基化参与调控的生物学过程


在全基因组甲基化测序等高精度表观遗传学研究中,DNA片段化是影响数据可靠性的核心环节。然而,传统技术路径存在一些痛点,制约了甲基化分析的准确性与应用场景拓展。



痛点一:机械打断成本高昂且难以实现自动化

传统超声打断依赖高价设备及专用耗材(如打断管、冷却模块),导致单次实验成本居高不下;且操作需人工设置参数(如功率、脉冲时间),难以实现自动化流程。更关键的是,在微量或降解样本(如FFPE DNA)中,样本的损失比较大。



痛点2:常规酶法存在“甲基化修饰陷阱”,导致假阴性结果

市面常规片段化酶虽能实现温和条件下的DNA切割,但在甲基化样本中存在致命缺陷:会修饰5-mC,导致甲基化水平被低估。



解决方案:翌圣生物重磅推出Hieff UltraShear甲基化片段化酶,专为甲基化设计的酶切体系


产品特点

01.保留甲基化信息


与传统片段化酶相比,能有效保留DNA甲基化标记,适用于表观遗传学研究。

02.低损伤高得率


对模板损伤小,样本损失率低,相比超声法显著提升DNA回收效率。

03.操作简便高效


酶切法替代繁琐的超声打断步骤,无需专业设备,让片段化更简单快速。

04.样本兼容广泛


支持>5 ng的动植物、微生物基因组DNA,并特别兼容FFPE等降解样本。

产品性能


不同酶切时间的片段化大小

采用200 ng 293gDNA样本,分别用12218和竞品进行酶切,酶切时间为10 min 、15 min、 25min 、35 min、 45 min ,将酶切体系进行琼脂糖凝胶电泳,结果如图1,展示了不同打断时间获得的平均片段大小。


图1.不同打断时间获得的平均片段大小



甲基化位点占比分析

以293T gDNA、小鼠 gDNA及水稻gDNA为样本,比较了三种DNA片段化方法(常规酶切、超声打断、12218甲基化片段化酶切)对样本甲基化水平的影响。所有样本均采用甲基化双链建库试剂盒(Cat#12214)进行文库构建,并经超快速甲基化转化试剂盒(Cat#12229)处理后,通过Illumina NovaSeq平台进行测序分析,如图2所示:常规酶切试剂会干扰甲基化分析,不适用于甲基化研究,12218甲基化位点占比和超声几乎一致。


图2.常规酶切、超声打断、12218甲基化片段化酶切对样本甲基化水平的影响



评估甲基化片段化酶切和超声打断对样本的损伤

以293T gDNA、小鼠 gDNA及水稻gDNA为样本,比较了两种DNA片段化方法(超声打断、12218甲基化片段化酶切)对样本的损伤程度。所有样本均采用超快速甲基化转化试剂盒(Cat#12229)处理后,并经甲基化单链建库试剂盒(Cat#12221)进行文库构建,通过Illumina NovaSeq平台进行测序分析,如图3所示:超声打断相对12218酶切打断,文库产量会偏低,超声打断的样本损失更大,尤其对于低投入量样本。


图3.超声打断、12218甲基化特异性片段化酶切对文库产量的影响


翌圣生物凭借在甲基化检测原料领域多年深耕的技术积淀,已构建覆盖全流程的甲基化检测整体解决方案:从高效稳定的样本DNA提取试剂,到超快速且转化率优异的甲基化转化试剂盒,再到精准兼容甲基化位点的片段化酶与建库试剂,全方位赋能表观遗传学研究。



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翌圣生物科技(上海)股份有限公司成立于2014年,是一家聚焦生命科学产业链上游核心原料,从事核苷酸、蛋白、细胞和类器官四大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业。公司兼备核心技术自主研发和规模化生产能力,核心产品数量达数千种,覆盖分子克隆、qPCR、NGS、体外转录、抗体、蛋白纯化及分析、细胞培养、转染、报告基因检测和类器官等多种系列,广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。

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