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麦角硫因(ergothioneine,EGT)作为一种天然手性氨基酸衍生物,存在硫醇和硫酮两种互变异构形式。研究表明EGT可抑制脂质过氧化损伤,清除羟自由基(·OH)、超氧化物和单线态氧(1O2)等多种活性氧(ROS)物质,是优异的皮肤光敏保护剂。通过紫外线照射光敏剂罗丹明B(RhB)溶液诱发包括1O2在内的自由基体系(简称UV-RhB体系),模拟紫外线照射人体皮肤产生ROS的情况,研究EGT在此体系下的抗氧化性能及其稳定性,以期为EGT应用于抗衰护肤品的开发提供理论依据。
实验方法
1. UV-RhB体系中EGT和VC抗氧化性能的测定
以pH 7.2的磷酸盐缓冲液(PBS,取2.2 g Na2HPO4,0.3 g NaH2PO4和8.5 g NaCl,加水溶解至1000 ml)为溶剂,分别配制0.001 %罗丹明B溶液(RhB)、0~1.00 mg/ml的EGT溶液及维生素C(VC)溶液。按表1配制测定溶液体系I、II,置紫外光(波长254 nm,光强度5 mW/cm2)下照射。分别于0,1 h时,采用酶标仪,测定555 nm波长处吸收值(A0和A1),每个样品平行3份,计算0 h和1 h吸光度变化量的平均值(ΔA),以ΔA空白为基线,按下式计算体系中活性物质的抗氧化性能(F)。F(%)= (ΔA空白-ΔA样品)/ ΔA空白×100 ΔA空白式中,ΔA空白:空白对照溶液的吸收值的变化量(A0空白-A1空白);ΔA样品:样品溶液的吸收值的变化量(A0样品-A1样品)。
2.离子强度对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系III,EGT溶液浓度为0.25 mg/ml,以EGT浓度为0的体系作为空白对照,分别加入NaCl浓度分别为0 %,0.40 %,0.85 %,1.30 %,1.75 %的PBS。按2.1项下方法平行测定3份,取其平均值,计算不同离子强度体系的ΔA和F值。
按表1配制测定溶液体系IV,EGT溶液浓度为0.25 mg/ml,以EGT浓度为0的体系作为空白对照,用0.1 mol/L HCl溶液和0.1 mol/L NaOH溶液分别调节PBS缓冲液pH值为3.0,5.0,7.2,9.0,11.0。按1项下方法平行测定3份,取其平均值,计算不同pH体系的ΔA和F值。
4.还原剂对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系V,EGT溶液浓度为0.25 mg/ml,并以EGT浓度为0的体系作为空白对照,Na2SO3溶液以PBS缓冲液为溶剂,浓度分别为0 %,0.02 %,0.05 %,0.10 %,0.25 %,0.50 %。按1项下方法平行测定3份,取其平均值,计算不同还原剂浓度体系的ΔA和F值。
5.金属离子对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系VI,其中溶剂为生理盐水,EGT溶液浓度为0.25 mg/ml,并以EGT浓度为0的体系作为空白对照。分别加入0.05 mol/L的K+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+生理盐水溶液。按1项下方法平行测定3份,取其平均值,计算不同金属离子体系的ΔA和F值。
6.EDTA对EGT抗氧化性能的影响
按表1配制测定溶液体系VII,其中溶剂为生理盐水,EGT溶液浓度为0.25 mg/ml,并以EGT浓度为0的体系作为空白对照。分别加入0.10 mol/L的Fe3+溶液和0 %,0.02 %,0.04 %,0.10 %,0.20 %的EDTA溶液。按1项下方法平行测定3份,取其平均值,计算不同EDTA浓度体系的ΔA和F值。
实验结果
不同浓度EGT和VC的抗氧化性能见图1。由图1可见,0~1 mg/ml范围内,EGT和VC的F值随浓度的升高而增大,且相同浓度下EGT的F值一直高于VC,表明EGT和VC抗氧化作用具有较好的量效关系,同时在此体系下EGT的抗氧化性能优于VC。
离子强度对EGT抗氧化性能的影响见图2。由图2可见,NaCl浓度在0 %~0.85 %范围内,EGT的F值较为稳定,当NaCl浓度高于0.85 %时,F值急剧下降,表明此时EGT抗氧化性能受到体系内高离子强度的抑制而显著降低。
pH值对EGT抗氧化性能的影响见图3。由图3可见,在pH 5~9范围内EGT的F值变化相对较小,表明EGT抗氧化活性在pH 5~9范围内较为稳定。
还原剂亚硫酸钠对EGT抗氧化性能的影响见图4。由图4可见,随着亚硫酸钠浓度的增大,F值呈下降趋势,表明在此体系中加入亚硫酸钠可抑制EGT的抗氧化活性。亚硫酸钠浓度大于0.1 %时,F值趋于稳定,表明其抑制作用趋于平缓。
实验结论
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