重组人纤维连接蛋白：高效提升病毒转染效率的关键辅剂

细胞表面VLA-4及VLA-5可分别与Fibronectin上的CS-1 位点及C-Domain结合，逆转录病毒载体可以与H -Domain结合。该技术可将转导效率显著提高，降低病毒用量50-80%，减少细胞毒性。

抗CD3抗体（OKT3）与FN联合包被可协同激活T细胞并增强转导；离心感染（Spinoculation，800-1000×g）进一步提高效率；多次转导策略可提高高表达细胞比例。

包被板制备：FN储存液（1 mg/mL）冰上解冻，无菌PBS稀释至25-50 μg/mL；加入非组织培养处理板，2 mL/孔（6孔板）；室温2小时或4°C过夜；2% BSA/PBS封闭30分钟；PBS洗涤1次，备用或4°C保存（48小时内使用）。

病毒预结合（可选）：将慢病毒上清加入包被孔，32°C孵育1-2小时，使病毒与FN结合。

细胞转导：收集靶细胞（如活化T细胞，0.5-1×10? cells/mL），加入包被孔；加入病毒（MOI 1-10）；离心感染：800-1000×g，32°C，1-2小时；37°C、5% CO?继续培养；24-48小时后检测转导效率。

关键参数优化：FN浓度25-50 μg/mL（根据细胞类型优化）；病毒MOI 1-10（RetroNectin可显著降低所需MOI）；细胞密度0.5-1×10?/mL（避免过度拥挤）。

YEASEN提供HiActi 重组人纤维连接蛋白Fibronectin，由哺乳动物系表达、经分离纯化和过滤除菌等步骤制成 ，该产品具有高纯度、高活性、低内毒素和高稳定性的特点。

图1.Human Fibronectin on SDS-PAGE under reduced condition. The purity is greater than 90%.

高活性

y a celI adhesion assay using B16-F1 mouse melanoma cells is less than 1.1 μg/mL,corresponding to a specific activity of > 1.17 X 107 IU/mg.Fully biologically active when compared to standard.

1. Hanenberg H, et al. (1996). Colocalization of retrovirus and target cells on specific fibronectin fragments increases genetic transduction of mammalian cells. Nature Medicine, 2(8):876-882. （RetroNectin奠基性研究）