百亿市场！2026最新发布cfDNA甲基化肿瘤标志物检测专家共识

随着个体化医疗的快速发展，血液游离DNA（cfDNA）甲基化肿瘤标志物在临床诊疗中的重要性日益凸显，但其应用范围和实验室检测尚缺乏统一标准。本专家共识参考最新研究发现，结合国内外临床实践，对血液cfDNA甲基化肿瘤标志物的基础理论、实验室检测以及临床应用等方面进行全面梳理，提出专家意见并深入讨论，形成检测应用的共识推荐。本共识旨在为cfDNA甲基化这一新兴肿瘤标志物的临床实践提供参考，以提升临床相关人员对其重要性和适用性的认识，从而促进其在精准医学中的健康规范发展。

DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase，DNMT）的催化作用下，将甲基基团添加到 DNA分子中特定碱基（在真核生物中主要是胞嘧啶）上的过程。它是一种重要的表观遗传调控机制，可以在不改变基因序列的情况下选择性增强或沉默特定基因表达，从而导致相应的生物学功能改变。DNA的甲基化修饰调控通常发生在基因启动子区域的CpG二核苷酸位点。CpG岛甲基化水平下降，往往促进基因的转录和表达，而CpG岛甲基化水平上升，则更倾向于抑制基因的表达 。DNA甲基化异常是肿瘤发生与演进过程中出现最早且生物学意义最为关键的表观遗传学改变之一，该类异常甲基化事件贯穿于肿瘤发生、发展的各个阶段。

cfDNA是细胞内核酸片段通过坏死、凋亡或细胞的主动释放进入体液的短链DNA（150~200 bp） 。血液cfDNA甲基化标志物检测是肿瘤液体活检的主要方法之一，与传统的肿瘤标志物相比，这类标志物具有更高的敏感度和特异度，同时还兼具无创、早期、精准等优点，被广泛用于肿瘤筛查、辅助诊断、预后评估等领域的临床研究 。近年来，国内外已有多款基于血液cfDNA甲基化的肿瘤检测商品化试剂盒相继获批上市，推动了该领域的临床转化与应用进程。

1.血液cfDNA甲基化检测的实验室要求

共识1 血液cfDNA甲基化检测需在具备开展临床基因扩增能力资质的医学实验室中开展。实验室各区域在物理空间上需相互独立，避免污染。若实验室同时开展血液cfDNA和细胞基因组DNA检测，应设置不同的样本制备区以降低污染风险（高级证据，强推荐）。

解读：实验室布局上应分别设立试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区等区域，各区域的气压、温度、湿度等环境参数应严格按照仪器设备的最适工作条件设定，且在物理空间上相互独立，避免污染。

2. 实验室体系构建

共识2 血液cfDNA甲基化检测实验室应针对血液cfDNA甲基化检测的各个关键环节，建立健全质量管理体系以规范分析前、分析中及分析后的操作流程。开展血液cfDNA甲基化肿瘤标志物的临床检测前，应对检验全流程进行严格的性能评估和验证（高级证据，强推荐）。

解读：cfDNA甲基化肿瘤标志物的检测流程包括分析前、分析中和分析后3个阶段，质量控制需贯穿检测的所有环节，各环节还应设立严格的防污染措施。项目开展前，应建立相应的程序文件，包括对场所、人员、设备、质控、试剂耗材等多个要素的管理控制程序。此外，应规范和严格执行开展项目的所有SOP文件。

3. 实验室人员要求

共识3 血液cfDNA甲基化检测的实验室人员需经过有资质的卫生机构培训，并取得基因扩增实验室技术人员培训合格证书，经理论和操作技能考核合格后方可上岗。报告人员还应具备中级及以上临床医学检验技术资格或主治及以上病理、检验医师资格，以及1年以上分子诊断相关工作经历。建议定期对相关检验人员进行能力评估与考核（中级证据，强推荐）。

解读：实验室负责人应具有临床医学专业背景、3年以上分子诊断相关工作经历、高级专业技术职称。所有从事人员应经过有资质的卫生机构培训，并取得基因扩增实验室技术人员培训合格证书。检测报告出具人员需具备中级及以上临床医学检验技术资格或主治及以上病理、检验医师资格，且拥有1年及以上分子诊断相关工作经历。

4. 样本采集、运输及前处理

共识4 推荐采用血浆标本进行血液cfDNA甲基化标志物检测，采样时建议使用含细胞保护剂的cfDNA专用采血管，血液采集后按要求送至检测实验室处理，不得冰冻血样；推荐使用两步离心法分离血浆，分离后的血浆样本可按实验计划进行短期或长期保存（中级证据，强推荐）。

解读：血液cfDNA甲基化肿瘤标志物检测通常优先采集血浆样本。采血管抗凝剂推荐选用乙二胺四乙酸；肝素可抑制PCR反应，干扰检测结果准确性，故不建议采用肝素类抗凝剂 。鉴于cfDNA易发生降解，建议采用含细胞保护剂的专用抗凝管（如Streck采血管、游离DNA保存管等）开展样本采集。采集后应尽快送检，采用两步离心法（例如2-8℃、1500×g离心12分钟两次）分离血浆。分离后的血浆可在不同温度条件下短期或长期（-70℃及以下）保存，并避免反复冻融。

5. cfDNA提取与纯化

共识5 应根据检测项目要求选择合适的提取方法进行核酸提取。其中，磁珠法是现阶段临床实践中应用最为广泛的cfDNA提取与纯化方法。针对批量化开展的cfDNA甲基化临床检测工作，建议采用磁珠法结合自动化仪器完成cfDNA的提取与纯化操作，以提升提取效率，降低人工操作引入的误差（中级证据，强推荐）。

解读：该共识推荐了主流的提取方法。磁珠法基本原理是基于磁性纳米颗粒的吸附作用，其提取cfDNA质量高（与离心柱过滤法相当）、操作简便且易于实现自动化，尤其适用高通量样品处理，是目前最为主流的cfDNA提取和纯化方法。cfDNA提取后应检测产物浓度和纯度，有条件的实验室还建议进行cfDNA片段长度分析。

6. cfDNA转化与预处理

共识6 cfDNA需进行转化和预处理以适配后续的甲基化分析技术。重亚硫酸盐转化准确性高、重复性好，推荐应用于临床血液cfDNA甲基化检测。同时需密切关注转化分析方法的新进展（中级证据，强推荐）。

解读：转化是DNA甲基化检测的关键步骤，其作用是将DNA转化为能够检测其甲基化状态的形式。重亚硫酸盐转化法是目前最常用的转化方法。需要注意的是，亚硫酸氢盐溶液对氧气较为敏感，开封后应尽快使用，以避免其活性成分被氧化失效。

7. cfDNA甲基化检测

共识7 cfDNA甲基化检测方法包括甲基化PCR、测序技术和核酸质谱技术等。其中基于PCR技术的cfDNA甲基化检测（包括数字PCR检测）是临床应用最广泛的检测技术，具有操作便捷、准确性高以及成本低等优势，推荐应用于低通量的血液cfDNA甲基化肿瘤标志物的临床检测。基于测序平台的血液cfDNA甲基化检测可满足高通量需求，多用于甲基化标志物的筛选等临床前研究。核酸质谱平台的通量和成本介于前二者之间，适用于中通量血液cfDNA甲基化分析（高级证据，强推荐）。

解读：cfDNA甲基化检测的方法主要包括甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR，MSP）/定量MSP（quantitative MSP，qMSP）、数字PCR、测序法、甲基化芯片以及核酸质谱法等。MSP是在科研和临床中被广泛应用的一种经典的基因座特异性DNA甲基化检测方法。在临床实践中，最常采用的是基于实时荧光定量PCR平台的qMSP。数字PCR也是一种基于PCR的绝对定量技术，在低丰度靶标检测中表现更优。基于测序和核酸质谱的技术主要用于临床前研究和标志物筛选。

8. 数据分析与结果审核

共识8 血液cfDNA甲基化肿瘤标志物检测结果需在满足质控标准的前提下进行分析解读。检测实验室应做好检测结果解读与临床咨询工作，以保障血液cfDNA甲基化肿瘤标志物临床应用的有效性（中级证据，强推荐）。

解读：实验室应对每批次临床样本和阴、阳性质控及无模板对照进行同步检测，最终数据分析时质控结果应在允许的范围内。对于临床检测标本，每份样本均需设置内对照，在最终检测结果确认前，应审核各样本内对照结果是否符合该检测项目的预设要求。通常情况下阳性不能作为肿瘤的确诊依据，阴性也不排除肿瘤可能，检测结果解读及相关临床咨询需由具备资深专业背景的人员完成。

1. 血液cfDNA甲基化标志物应用于肿瘤辅助诊断

共识9 血液cfDNA甲基化标志物是理想的肿瘤辅助诊断标志物。基于甲基化PCR的单个或少数cfDNA甲基化靶标联合检测对多种肿瘤均具有较高的特异性，推荐应用于结直肠癌、肝癌、胃癌、食管癌以及肺癌等恶性肿瘤的辅助诊断。（中级证据，推荐）。

解读：涉及辅助诊断的肿瘤类型包括结直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌等，其中应用最多的为结直肠癌。目前已批准用于结直肠癌辅助诊断的多靶标联合检测标志物包括血浆Septin9/SDC2/BCAT1甲基化联合检测、血浆Reprimo/SDC2/TCF4甲基化联合检测、血浆NTMT1/MAP3K14-AS1甲基化联合检测以及血浆Septin9/BCAT1/IKZF1/BCAN/VAV3甲基化联合检测等。肯定了血液cfDNA甲基化在肿瘤辅助诊断中的价值。

2. 血液cfDNA甲基化在多癌种早期检测（multicancer early detection，MCED）领域展现出良好的应用潜力

共识10 血液cfDNA甲基化标志物在肿瘤筛查，尤其是结直肠癌筛查中具有应用潜力，但对癌前病变或早期肿瘤筛查的敏感度仍不够理想。由于目前对癌前病变的敏感度不足，且缺乏大规模前瞻性研究和卫生经济学评估的证据，暂不推荐血液cfDNA甲基化标志物单独应用于无症状人群的肿瘤和癌前病变筛查（中级证据，强推荐）。

解读：血液cfDNA甲基化在多癌种早期检测（multicancer early detection，MCED）领域展现出良好的应用潜力。《基于液体活检技术的多癌种联合筛查专家共识（2025）》明确指出，cfDNA甲基化是MCED的核心标志物。循环游离基因组图谱研究协作组构建的早诊模型Galleri在大规模病例对照研究中体现出多癌种筛查的潜力。该模型检测50余种肿瘤的总体敏感度为51.5%，特异度为99.5%  。针对胃癌、食管癌、结直肠癌、肺癌和肝癌的甲基化早诊模型PanSeer预测3~4年后恶性肿瘤的敏感度可达95.7%

3. 血液cfDNA甲基化标志物在肿瘤预后监测、用药指导及肿瘤溯源等方面具有潜在应用前景

共识11 血液cfDNA甲基化标志物在肿瘤预后监测、用药指导及溯源等方面具有潜在的应用前景，但目前临床应用尚不成熟，仍需积累更多临床证据（中级证据，强推荐）。

解读：目前cfDNA甲基化检测在肿瘤用药指导中应用较少，以ESR1基因为例，其在cfDNA中的检出率远低于组织标本，这限制了其临床转化。在肿瘤溯源方面，cfDNA甲基化对多种肿瘤溯源准确性较高，但不同肿瘤类型间差异明显，肝癌溯源准确性最高，肺癌最低。当前研究多针对已知原发灶患者，未来需更多前瞻性数据，推动其在原发灶不明肿瘤溯源中的临床应用。

随着《血液游离 DNA 甲基化肿瘤标志物实验室检测与临床应用专家共识（2025 版）》的发布，cfDNA 甲基化的临床价值与技术规范进一步明确。翌圣生物依托自主核心技术，已构建从cfDNA 提取、甲基化转化（化学 / 酶法双路径）、甲基化专属建库到配套酶与磁珠的全流程完整解决方案，覆盖低起始量、高转化率、高完整度等关键需求翌圣生物，为肿瘤筛查、预后监测、用药指导与溯源等临床应用提供稳定、高效的试剂与技术支撑，加速共识成果向临床实践转化。

参考文献：中华医学会检验医学分会. 血液游离DNA甲基化肿瘤标志物实验室检测与临床应用专家共识（2025版）[J]. 中华检验医学杂志, 2026, 49(2): 160-171. DOI: 10.3760/cma.j.cn114452-20251023-00595.