小规模蛋白如何快速纯化和筛选？

Protein A Mag Sepharose和Protein G Mag Sepharose磁珠以琼脂糖凝胶为基架，分别以天然Protein A和Protein G为配体，对广泛物种来源的IgG抗体的Fc区具有高亲和力。可提供快速经典实验方案 (Classic protocol) 和交联实验方案 (Crosslink protocol) 两种不同的选择（图2）。

相较于Protein A Mag Sepharose和Protein G Mag Sepharose磁珠，Xtra系列磁珠拥有更高的结合载量，＞27 mg human IgG/mL。更高的结合载量可以高效捕获抗体，并达到高产量和高纯度的要求。用于对血清和细胞上清液中的单克隆和多克隆抗体进行快速、小规模的纯化及筛选。

取300 μL Human IgG作为spiked in加入到大肠杆菌裂解液中，并使用磁珠纯化（图3）。进行6次平行试验，结果发现抗体回收率＞80%，SDS-PAGE结果分析显示，六次重复运行得到的纯度在90%以上 (RSD<2%) 。

NHS Mag Sepharose为预活化的磁珠，与蛋白质、不同种类的抗体和诱导体等可以通过氨基进行共价偶联。NHS Mag Sepharose是血浆样品免疫沉淀的首选，因为内源性免疫球蛋白可能与Protein A Mag Sepharose或Protein G Mag Sepharose的剩余自由配体结合。

图4实验中使用小鼠单克隆抗体偶联NHS Mag Sepharose磁珠，并从血浆样品中富集纤溶酶原，实验结果可以看出，NHS Mag Sepharose相较于Protein A Mag Sepharose可实现更高水平目标蛋白纤溶酶原的富集。

His Mag Sepharose Ni磁珠，通过固相金属离子亲和层析 (IMAC) 快速小规模纯化和筛选来自不同来源的组氨酸标签蛋白质。His Mag Sepharose Excel磁珠同样基于IMAC，但镍离子非常牢固地结合至螯合配体上，因此可以耐受一定浓度的螯合剂（如0.1 mM EDTA），可用于直接捕获分泌到培养基中的表达蛋白，例如昆虫细胞或中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞等真核细胞分泌的蛋白，而无需进行过滤和浓缩。

为了验证His Mag Sepharose Excel磁珠纯化的灵活性，我们使用200 μL磁珠悬液纯化1 mL样本以及使用1 mL磁珠悬液纯化50 mL样本，将体系放大50倍，结果发现小规模纯化和大规模纯化的回收率和纯度相差不到10%，可实现不同体积样本的灵活纯化。