助力奥运，LC-MS/MS应对48种食源性兴奋剂检测方案（文末有礼）

2024-08-09 09:39:45 126阅读次数

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食源性兴奋剂是指来源于食品中的兴奋剂，包括一般性食品及保健食品中从生产到加工过程中天然存在或故意添加而残留的兴奋剂成分。运动员食用含有兴奋剂成分的食品，不仅会对比赛公平性和个人名誉造成损害，还可能对国家的形象及食品安全声誉造成负面影响。目前，来源于肉类食品的饮食污染、其他食品或药物误服而导致的食源性兴奋剂困扰事件层出不穷。

兴奋剂禁用清单的修订与更新始终是WADA（世界反兴奋剂机构）及我国体育运动管理部门的重要工作内容，禁用清单上所列的兴奋剂种类与检测方法不断丰富和变化。由WADA颁布的《禁用清单国际标准》（Prohibited List）包括S1～S9的9大类具有镇静、抑制或掩蔽功能的禁用药物和3类禁用方法。2008年，北京奥运会组委会根据WADA制定的标准，依据国家认监委规定的检测项目将食源性兴奋剂划分为4类：β2-受体激动剂类、合成类固醇类、糖皮质激素类和玉米赤霉醇类，分别对应WADA禁用清单分类的S1.蛋白同化制剂、S3. β2-激动剂和S9.糖皮质激素类。

本文采用 QSight 210 液质联用系统建立了对48种食源性兴奋剂的快速定性定量分析方法，根据保留时间及离子比率进行快速准确定性，通过定量离子色谱峰面积所制作的标准曲线进行准确定量，其检出限完全满足标准及相应的技术规范检测需求，为检测食源性兴奋剂提供完整解决方案。

实验方法

样品处理

从全部样品中取出有代表性样品可食部分500g，用高速粉碎机粉碎均匀，均分成两份作为试样和留样，分别装入洁净容器中，密封并标记，于-18℃保存。

准确称取2 g（精确至0.01 g）试样置于50 mL具塞离心管中，加入混合同位素内标液，涡旋混匀。加入2 mL2%甲酸水溶液和陶瓷均质子高速匀浆2 min，加入8 mL甲醇:乙腈 (6:4) 涡旋震荡5 min，4℃低温 9000r/min离心5 min。取5 mL上清液，加入到SWCX小柱中重力自流并收集，待液体流干后加入2 mL2%甲酸水：乙腈（2:8）洗脱，抽干小柱，收集所有洗脱液。40℃氮吹至干，准确加入1 mL水超声复溶，过0.22 μm针式过滤膜，滤液上机待分析。

LC-MS/MS仪器方法

LX50 UHPLC参数

色谱柱：

Quasar SPP C18， 2.1×100mm，2.6μm

柱温：35℃

流速：0.3 mL/min

进样量：5 μL

表1 48种兴奋剂化合物的液相色谱梯度洗脱表

质谱参数

采用 QSight 210^TM 三重四极杆质谱仪进行分析，离子源参数及目标化合物质谱参数见表2和表3。

表2 质谱离子源参数

表3 正离子模式下的兴奋剂类化合物及内标质谱参数列表

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表4 负离子模式下的兴奋剂类化合物及内标质谱参数列表

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结果与讨论

本方法采用一针进样，通过Time Managed MRM正负切换模式同时测定48种兴奋剂化合物，图1中展示了48种化合物的MRM叠加谱图。各个化合物的峰型对称，并获得优异的色谱分离效果，保证每个色谱峰上有足够的采集点数，以便获得准确的结果及优异的重复性。

图1 48种兴奋剂类化合物的MRM叠加谱图（10ng/ml）

采用上述前处理步骤，用空白基质稀释48种化合物的混合标准溶液，制成 1ng/mL?100 ng/mL 的系列校准标准溶液，并绘制标准曲线，采用内标法进行定量分析。其中各个化合物在线性范围内，线性关系均较好，相关系数R²均大于0.990。同时考察了检出限、定量限及6针重现性测试（见表5），实验结果表明，该仪器方法对于测定48种化合物具有优异的线性及重现性。

表5 48种化合物的线性相关系数、重现性及检出限结果