5 min快速甲基化转化试剂盒，无忧玩转表观建库！

DNA甲基化可以发生在胞嘧啶的C-5位、腺嘌呤的N-6位、鸟嘌呤的N-7位等，它们分别由不同的DNA甲基化酶催化，生成5-甲基胞嘧啶（5-mC）、N6-甲基腺嘌呤（N6-mA）及7-甲基鸟嘌呤（7-mG）。目前对于DNA甲基化的研究主要关注点在5mC以及6mA，甲基化研究技术也分为WGBS（研究5mC）、RRBS（研究5mC）、MeDIP（研究5mC）、6mA（研究6mA）等。其中，WGBS和RRBS能定位到单碱基分布的甲基化研究，MeDIP以及6mA主要基于特异性的甲基化修饰位点结合抗体来识别DNA甲基化区域，具有实验简单、成本较低等优点。

表.不同DNA甲基化技术对比

已知RNA存在超过100种修饰。在真核生物中，5’端的Cap以及3’的ployA修饰在转录调控中起到了十分重要的作用，而mRNA的内部修饰则用于维持mRNA的稳定性。RNA最常见的内部修饰包括N6-腺苷酸甲基化（m6A）、N1-腺苷酸甲基化（m1A）、胞嘧啶羟基化（m5C）等。目前RNA甲基化的研究主要在m6A和m5C上，对应的RNA甲基化研究技术为MeRIP（m5C）、m6A（m6A）等。这两种技术都是基于特异性识别核酸修饰的抗体进行靶向富集，两种技术都是非单碱基研究。

目前已经有很多技术来解决RNA甲基化单碱基分布的问题，2024年1月2日，芝加哥大学何川教授团队在Nature Biotechnology上在线发表了题为Ultrafast bisulfite sequencing detection of 5‑methylcytosine in DNA and RNA的研究论文，该研究提出并开发了对DNA和RNA上的5-甲基胞嘧啶修饰进行快速，准确检测的测序方法，简称为UBS-seq。该技术提出的5 min快速转化试剂盒，能够减少传统化学转化方法对RNA的损伤。

翌圣生物的Hieff^® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit便是基于此技术开发优化而成，可以在98°C 5min条件下可完成＞99.5%的胞嘧啶转化，并且极大的降低了DNA损伤，更好的保证了DNA片段的完整性。

图. Superfast DNA Methylation Bisulfite的技术原理及优势

Hieff^® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit（12225ES）将DNA变性与亚硫酸氢盐转化融合为一步，5分钟内即可完成转化，约30 min可完成BS转化全流程。采用柱内脱硫技术，使操作流程更为简单；可以满足100 pg-2 μg样品的转化；未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率≥99%；转化后的产物适用于PCR扩增和DNA测序等下游应用。

图4.Superfast BS转化实验流程

客户案例

客户A：使用12225与竞品Z转化试剂盒进行头对头对比，转化样本为15 ng 甲基化puc19+非甲基化λ DNA混合物，转化后的样本采用甲基化单链DNA建库，如图5所示：12225文库产量和对比率优于竞品Z，转化效率和竞品Z相当。

蛋白质甲基化是真核生物中普遍存在且关键的翻译后修饰 (PTM)，主要发生在赖氨酸残基和精氨酸残基上。常见的组蛋白甲基化修饰有H3K4me3、H3K9me3、H3K27me3以及H3K36me3等，不同的组蛋白修饰起不同的作用。组蛋白H3K4 （H3K4me1 和 H3K4me3）上的单甲基化和三甲基化都是活化标志物，但是也有着特殊 的细微差别：H3K4me1 通常会标记转录增强子，而 H3K4me3 则标记基因启动子。同时，K36 (H3K36me3) 的三甲基化是与基因转录区域相关的活化标志物。H3K27me3启动子区域的一个临时信号、H3K9me3是在具有串联重复结构的基因贫乏染色体区域形成异染色质的永久信号，如卫星重复序列、端粒和近着丝粒区。其中，H3K27me3位于基因间和沉默的编码区，H3K9me3主要位于活性基因的编码区。对于蛋白质甲基化有组蛋白甲基化研究CUT&Tag、ChIP-seq、CUT&RUN或者蛋白质修饰组的质谱研究。

表.CUT&Tag、ChIP-seq及CUT&RUN技术对比