案例分享：TIL疗法制造全解析

在TILs培养期间，给予高剂量的细胞生长因子白介素2（IL-2）以激活TILs并促进其生长。采用由NCI外科 Steven Rosenberg博士及其同事率先提出的快速扩增方法进行TILs扩增培养。第一阶段是静态培养阶段，第二阶段是利用Xuri W25进行动态大体积培养阶段。

首先，在一个静态密闭系统中，将肿瘤分解后的细胞在含有6000 IU/mL Xuri IL-2的Xuri EM培养基中培养7-21天，以达到1 E⁷的TILs细胞量（preREP阶段）。之后在含有3000 IU/mL Xuri IL-2的Xuri EM培养基加入anti-CD3抗体刺激和辐照后的PBMC作为饲养细胞，静态快速扩增7天后转移到Xuri 5 L培养体系中，进一步扩展到1 E¹⁰的TILs细胞量（REP阶段）。

经Xuri W25扩增后的TILs表现出记忆样表型，CD62L+ CD45RO+比例增加，更多的中央记忆T细胞从而有提高抗肿瘤的效应的潜能。

即使实现了大体积的TILs的扩增，对于其收获与制剂，也存在诸多污染和试样损耗的风险。

利用Sefia细胞处理仪器及其专用软件和套件，可以自动按顺序实现收获细胞和后续制剂。节约了时间，简化了繁琐的操作。

本例中，5 L的TILs细胞培养体系经Sefia S-2000洗涤收获制剂后，回收率可达89.52%左右。细胞活率也维持在较高水平。

对于同一批次的产品如何保障冻存与复苏的均一性，如何保证每次操作间的统一性，如何实现在运输途中的实时监控，如何尽可能得降低人工误差，如何在符合GMP标准的情况进行冻存复苏？这些问题都是TILs制备端持续关注的问题。

Cytiva VIA Freeze系列无液氮程序降温仪集可自定义的冷冻程序、电子控制系统和热传导冷却法于一身，符合GMP标准，且提供一致的样本质量。冻存后的细胞通过VIA Capsule超低温运输系统，专注于细胞治疗，实现无液氮的，可追溯的，可持续验证的低温冷链运输。运输完成后，搭配VIA Thaw自动化干热式细胞复苏仪，无水浴加热，将冷冻细胞袋均匀复苏。

在本例中，肿瘤组织与制剂后的TILs借助VIA Capsule超低温运输系统，实现了从马尔堡医院端到加利福尼亚实验室端到端的来回运输。经验证，制剂后的TILs在冻存、运输与复苏后，细胞的活力、免疫表型与功能均未发生显著变化。

研发生产过程产生的大量纸质记录需要大量人力进行审核与记录。通过云端的管理系统，可以智能化自动化的解决这一难题。

Chronicle是一款专为基因与细胞治疗领域设计的全自动云端管理系统，旨在优化细胞疗法开发与制造的复杂管理流程。它可以提供实时的供应链跟踪管理、仪器设备性能监控管理、短信和邮件的报警管理以及全面完备的电子批处理记录管理。同时，Chronicle可拓展集成连接多种第三方设备，并已根据GAMP5、21-CFR-11和EU附件11进行了独立审核。

本例中所有的设备和软件都连接上了Chronicle，实现了电子批记录，设备监控，物流集成监控，溯源等各种智能化场景。