【解决方案】马兜铃酸的检测

马兜铃酸是一类硝基菲结构化合物，主要存在于马兜铃科马兜铃属和细辛属植物中，含马兜铃酸的中药材主要包括金耳环、杜衡、朱砂莲、天仙藤、木香马兜铃、寻骨风、细辛等。马兜铃酸具有肾毒性、致突变及致癌作用，被世界卫生组织致癌物清单列为1类致癌物，长期或超量不规范服用含马兜铃酸的植物可引起肾脏损害、致癌和致突变等副作用。

目前，有关马兜铃酸的检测方法，主要是用甲醇水或甲醇提取，然后直接上机检测，这就存在基质效应大、回收率不稳定等问题。为了解决这些问题，根据目标化合物的性质，建立了马兜铃酸的检测方法，样品先用水溶解，再用酸化乙腈提取，提取液再进行两次净化，第一次先用C18净化提取液，然后再用PWA-2小柱进行二次净化，氮吹定容，上机。样品经过多次净化，除去了样品杂质，减小基质效应，并且还保证了目标物的回收率，结果显示，基质效应和回收率都在90-110%之间，完全满足客户需求。

本方案适用感特灵胶囊、丁细牙痛胶囊、胃炎宁颗粒、小青龙合剂中马兜铃酸的检测。

(1) 马兜铃酸储备液(500μg/mL)：准确称取适量马兜铃酸标准品，用甲醇溶解定容，配置成浓度为500μg/mL标准储备液；

(2) 标准中间液Ⅰ：准确吸取适量马兜铃酸标准储备液，用甲醇稀释并定容，配置成浓度为1μg/mL的中间液Ⅰ；

(3) 标准中间液Ⅱ：准确吸取适量马兜铃酸中间液Ⅰ，用甲醇稀释并定容，配置成浓度为0.1μg/mL的中间液Ⅱ。

称取试样0.5g于50mL离心管中，加入2mL水，涡旋混匀30s，再准确加入25mL 5%乙酸乙腈溶液，涡旋10min，超声提取10min，加入6g无水硫酸钠和1.5g乙酸钠(Cat.#: 64520s)，涡旋混合2min，4000r/min离心2min。取上清10mL，加入1g C18，涡旋混合2min，4000r/min离心2min，上清液备用。

ProElut PWA-2 250mg/6mL (Cat.#: 65823)

(1)活化：用5mL甲醇和5mL 2%甲酸水溶液活化小柱；

(2)上样：将4mL备用液上柱，弃去流出液；

(3)淋洗：依次用5mL水、5mL 2%甲酸水溶液、5mL甲醇淋洗小柱，弃去流出液，推干；

(4)洗脱：用4mL 5%氨水甲醇洗脱小柱，接收流出液，推干，混匀，过PTFE针头式过滤器(Cat.#: 37178)，上机分析。

注：同方法制备基质匹配标准溶液

(1) UPLC条件

色谱柱：Endeavorsil^? C18，100x2.1mm, 1.8μm (Cat.#: 87003)

流速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱温：35℃

流动相：A: 0.1%甲酸水溶液(含1mmol/L乙酸铵)  B: 乙腈

(2) 质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃