干货分享丨TSA(Tyramide signal amplification酪酰胺信号放大)技术

多重免疫荧光染色，也被称作酪胺信号放大（Tyramide Signal Amplification, TSA）技术，是一种利用辣根过氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。这项技术基于酪胺信号放大的多重顺次免疫染色技术，允许同时检测单个细胞或组织样本上的多个目标靶点，全面研究细胞组成、细胞功能和细胞间相互作用。TSA利用基于IHC免疫组化的“<一抗-二抗-HRP＞底物”原理及步骤，它所携带的辣根过氧化物酶（HRP），能够在过氧化氢（H?O?）的催化下，促使酪酰胺分子发生活化与沉积。这些沉积的酪酰胺分子就像无数个信号增强器，与荧光基团或其他标记物紧密相连，从而将微弱的信号大幅放大，让原本难以察觉的目标分子清晰地呈现在研究者眼前。

● 信号放大与检测灵敏度高：显著增强荧光信号，其放大倍数约为普通荧光的3-10倍。

● 多色标记能力强：可在同一组织切片上实现多种蛋白或核酸的共染色。

● 抗体种属来源不受限：在实验过程中，每一轮染色后可将上一轮的一抗和二抗洗掉，再进行下一轮染色，因此一抗的种属来源不会对后续染色产生影响，为实验设计和操作提供了更大的灵活性。

● 荧光稳定性好：荧光素稳定性高，不易淬灭，在实验操作过程中无需严格避光，染色后的玻片可保存数月之久。

1. 免疫荧光和免疫组化—TSA技术能够实现高灵敏度检测和多重染色

2. 原位杂交—通过结合特定探针，TSA可以进行RNA定位并提高信噪比

3. 流式细胞术—细胞表面标志物分析：TSA可用于放大流式细胞术中细胞表面标志物的信号，更加精确地区分不同的细胞群。

4. DNA修复与损伤标记：TSA技术可用于标记和量化DNA损伤修复蛋白

5. 蛋白质相互作用研究—邻近连接试验（PLA）：在研究蛋白质之间的相互作用时，TSA可以用来放大邻近连接事件产生的信号，提供更高的分辨率和灵敏度。

6. 生物传感和诊断—疾病标志物检测：利用TSA技术开发的生物传感器可以在早期阶段检测疾病相关的生物标志物，有助于疾病的预防和治疗。

7. 神经科学—神经递质和受体分布：TSA技术能帮助科学家更好地理解大脑中各种神经递质及其受体的空间分布情况。

8、空间组学：TSA染料能够提供细胞和组织中分子表达的空间分辨率信息。空间组学结合了基因组学、蛋白质组学和其他组学技术，以保留样本原始空间结构的方式分析生物分子。

优化条件：为了获得最佳结果，可能需要对一抗浓度、孵育时间以及TSA底物浓度等多个参数进行优化。

控制背景：虽然TSA提高了信号强度，但同时也可能导致非特异性背景增加。因此，选择合适的封闭剂和清洗步骤是减少背景的关键。

避免过度放大：有时过量的信号放大可能会掩盖真实的生物信息，所以应该谨慎调整放大倍数，确保结果的真实性和可靠性。

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