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【科研必备】胶原酶全攻略(内附大量文献总结的胶原酶选择方案)

来源:赛默飞世尔科技生命科学产品 更新时间:2025-08-11 17:15:23 阅读量:183
导读:【科研必备】胶原酶全攻略(内附大量文献总结的胶原酶选择方案)



?? 胶原酶:解锁组织奥秘的“分子剪刀”



胶原酶作为组织解离的核心工具,能够特异性切割胶原蛋白的三螺旋结构,是获取高活性单细胞悬液的关键。无论是类器官构建单细胞测序,还是原代细胞培养,胶原酶都是不可或缺的科研助手!



?? 胶原酶选择指南



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胶原酶类型与适用组织

注:胶原酶的选择需根据组织类型和具体实验需求灵活调整,有时需联合分散酶 II (Dispase II)、DNase I等酶协同消化。建议优先参考已验证的实验方案及相关文献的方法进行优化。

?? 经典文献案例速递——胶原酶助力单细胞研究新突破

1. 运动抗衰老机制(Sun S, et al. Innovation (Camb). 2023. PMID: 36747595)

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研究亮点:通过单细胞转录组技术绘制了运动对小鼠全身14种组织的抗炎和抗衰老效应图谱。这项研究不仅揭示了运动通过调控昼夜节律蛋白BMAL1延缓衰老的机制,而且其丰富的数据集为探索靶点提供了宝贵的资源。



小鼠不同组织特异性解离方案



2. 首个猪多器官单细胞图谱(Wang F, et al. Nat Commun. 2022. PMID: 35750885)

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研究亮点:首次绘制了猪多器官单细胞转录组图谱,覆盖20种组织/器官,超过20万个细胞,鉴定出58种主要细胞类型,为猪模型研究提供了宝贵资源。深入整合分析内皮细胞,发现其高度异质性,揭示了脂肪组织中存在内皮-间质转化(EndMT)亚型,并揭示了由TGF-β2驱动的动态转化机制。此外,鉴定了小胶质细胞核心转录因子MEF2C的跨物种保守性,为神经疾病研究提供了新的靶点。



猪不同组织特异性解离方案





?? 实操技巧:提升解离效率



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01


缓冲液优化

  • 推荐使用含钙镁离子的HBSS缓冲液(例如货号14025092)配制胶原酶消化液,以优化组织消化效率。若需进一步增强消化效果,可额外补充3 mM CaCl?(因Ca2?是胶原酶活化的必需辅助因子)。

  • 避免与含EDTA的溶液(如胰酶-EDTA)混合使用,如需使用,建议分步消化。

02


化条件

  • 37℃水平摇床(50-100 rpm)促进均匀消化。

03


纯化

  • 细胞筛过滤:去除未消化团块(如单细胞测序、流式细胞术)。

  • 红细胞裂解:高血管化组织(如脾脏、肝脏)。



常见问题解答



Q

赛默飞胶原酶如何配制和保存?

A

使用含钙镁的HBSS(货号14025092)配制成100 U/μL (1000X) 的储液,然后使用低蛋白吸附的0.22μm滤膜过滤除菌,分装后储存于-5℃至-20℃,后续使用时尽量避免反复冻融。具体的活性单位请参见瓶身标签或对应批次的质检报告(COA)。

Q

胶原酶的工作浓度是多少?如何确定最佳使用浓度?

A

胶原酶的典型工作浓度为 50-200 U/mL(或 0.1-0.5% w/v),但不同组织需优化酶浓度和时间,建议参考文献并进行实际验证。



产品订购信息



如果大家想了解更多胶原酶选择方案,比如小鼠皮下肿瘤、骨组织、心脏、人软骨、胎盘等,请扫描下方二维码获取手册研读(方案整理自多篇参考文献)。

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