类固醇是一类脂溶性小分子激素,是由胆固醇经过一系列酶催化而来,其中包括雄激素、雌激素、孕激素和肾上腺皮质激素。类固醇激素升高和降低与许多疾病有关,如先天性肾上腺皮质增生症(CAH)、多囊卵巢综合症、肾上腺皮质功能不全等相关,类固醇激素的测定在临床疾病诊治中有着重要作用。
但由于其体内含量低,检测难度大,开发一种操作简便,精度高的检测技术已成为医疗检测领域的重要工作。液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法凭借其高通量、高灵敏度、高特异度等优势近年来更加广泛地应用于类固醇激素的检测。
但由于类固醇激素种类繁多,同分异构体(如21-羟孕酮和17α-羟孕酮,11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇和皮质酮)的分离是液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测中的难点和挑战。专门针对以上分离难点开发了E-Gen 类固醇激素检测专用柱,并优化色谱条件,实现了类固醇激素异构体的基线分离,助力21种类固醇激素的快速准确检测。
实验条件
(1)液相色谱条件
1)色谱柱:E-Gen 类固醇激素检测专用柱,2.1×100mm,2.6μm(LAVD-2110C11)
2)流动相:A:0.5mM氟化铵水溶液,B:甲醇,梯度洗脱程序见表1
3)流速:0.4mL/min
4)柱温:40℃
5)进样量:5μL
(2)质谱条件
谱图对比
(1)E-Gen 类固醇激素检测专用柱,2.1×100mm,2.6μm
保留时间(min):1、Melation:0.93;2、DHEAS:1.16;3、E3:1.46;4、ALDO:1.59;5、E:1.85;6、F:2.20;7、21DOC:3.02;8、Dexamthasone:3.23;9、CORT:3.45;10、S:3.78;11、E1:4.75;12、A4:4.75;13、E2:4.83;14、21-OHP:5.23;15、T:5.54;16、17OHP:5.65;17、DHEA:5.76;18、17OHPR:5.76;19、DHT:6.12;20、P:6.32;21、P5:6.52。
采用E-Gen 类固醇激素检测专用柱,2.1×100mm,2.6μm(LAVD-2110C11),21-羟孕酮和17α-羟孕酮2个同分异构体可以得到很好的分离,还可避免17α-羟孕酮对17α-羟基孕烯醇酮的定量干扰;同时,11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇和皮质酮3个同分异构体也得到基线分离。
(2)进口W品牌色谱柱,2.1×100mm,1.7μm
总结
采用E-Gen 类固醇激素检测专用柱,2.1×100mm,2.6μm(PN:LAVD-2110C11),可实现了类固醇激素异构体的基线分离,效果与进口W品牌色谱柱相当,助力21种类固醇激素的快速准确检测。
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