【解决方案】肽类血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂的纯化

实验所用粗品多肽为外购所得。利用 ACCQPrep HP150 制备色谱系统进行方法开发筛选，以验证该多肽的结构同一性，并确认默认电离参数可实现该多肽的质谱检测（图 1）。

测得分子量与理论值高度吻合（单同位素分子量 1091.5 Da）。可观测到的峰包括： [M+H]?：1091 Da； [M+Na]?：1112 Da；双电荷离子峰 [M+2H]2?：546 Da

方法开发在 安捷伦 1290 超高效液相色谱（UHPLC）系统上完成，色谱柱采用实验级 Teledyne ISCO C18 柱（4.6 × 50 mm，2 μm 填料，流速 1.0 mL/min），其填料与后续纯化所用的 RediSep? 制备型 C18 柱相匹配。该超高效液相色谱系统同时配备质谱检测器，设定为监测 546 Da 处的双电荷离子 [M+2H]2?（图 2）。梯度洗脱程序设置为：乙腈 / 水溶液体系从 5% 乙腈线性升至 100% 乙腈，水相和有机相中均添加 0.1% 三氟乙酸（TFA）。

超高效液相色谱图谱显示，在1.843 min处洗脱的目标多肽存在明显杂质。根据其保留时间推测，采用11%–21%B的梯度范围，可实现目标多肽与邻近洗脱杂质之间的最佳分离。

取12.9 mg该多肽，采用 20×150 mm RediSep 制备型 C18 柱进行纯化。使用 ACCQPrep HP150 制备纯化系统（产品编号：68-5230-035），配合 CombiFlash? PurIon 质谱检测器进行检测（图 3）。

流动相梯度为 11%–21%B（水 / 乙腈体系，两相均含 0.1% 三氟乙酸 TFA）。样品用 0.5 mL 二甲基亚砜（DMSO） 溶解，再加入 0.1 mL 水。通过设置时间窗口，仅收集含目标多肽的馏分。

在约 5.5 分钟 处洗脱的峰，其质谱与目标多肽一致。将该组分经旋转蒸发除去乙腈，再进行冷冻干燥，最终得到 8.1 mg 纯品。

取该纯化馏分在分析型超高效液相色谱上进行分析（图 4）。本次实验使用了不同型号的色谱柱，以防存在共流出杂质；更换不同键合类型的 C18 柱有助于暴露这类杂质。

Figure 4: Analytical run of purified HNWYPAAPH

ACCQPrep HP150 系统联用 CombiFlash PurIon 质谱检测器，是用于多肽纯化的优异平台。若需要制备更大批量的样品，可搭配自动进样器选件，实现同一样品的多次自动进样与全自动纯化。该系统搭载专利主动溶剂管理技术，可在任一溶剂瓶中溶剂不足时自动停泵，避免样品损失。

¹Lee,S-J; Kim, Y-S; Kim, S-E; Kim, E-K; Hwang, J-W; Park, T-K; Kim,B.K; Moon, S-H; Jeon, B-T; Jeon,Y-J; Ahn,C-B; Je, J-Y, Park, P-J.Purification and Characterization of a Novel Angiotensin I-Converting Enzyme Inhibitory Peptide Derived from an Enzymatic Hydrolysate of Duck Skin Byproducts. J. Agric. Food Chem. 2012, 60,10035-10040