大鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)ELISA试剂盒实验使用说明书主要包括试剂准备、样本收集与处理、实验操作及结果计算等部分。以下是详细说明:
一、试剂准备
试剂盒组件:通常包括酶标包被板、标准品、标准品稀释液、酶标试剂、样品稀释液、显色剂A液和B液、终止液、封板膜、洗涤液等。
试剂保存与平衡:试剂盒应保存在2-8℃或-20℃(长期不用时)。使用前,将试剂盒从冰箱中取出,在室温下放置20-30分钟,使试剂盒与室温平衡。
二、样本收集与处理
样本类型:包括血清、血浆、尿液、脑脊液、细胞固体组织等2。
血清与血浆处理:使用不含热原和内毒素的试管收集血液,离心分离血清和红细胞。血浆可使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,离心去除颗粒。
样本保存:若样本不立即使用,应分成小部分在-70℃保存,避免反复冷冻。避免使用溶血或高血脂血样本。
三、实验操作
加样:在待测样品孔中加入待测样品,每种样品设3个平行孔。同时设立阴性对照孔和空白对照孔。
酶标板包被:将酶标板置于4℃,包被过夜。
洗板:使用洗涤液洗涤板孔,重复洗涤3-4次。
加酶标试剂与显色:加入酶标试剂,然后加入显色剂A液和B液,进行显色反应。
终止与测定:加入终止液终止反应,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。
四、结果计算
绘制标准曲线:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线。
样品浓度计算:根据样品的OD值,由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。或者使用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式计算样品浓度1。
请注意,实验操作时应严格按照说明书进行,避免污染和误差。不同品牌和批次的试剂盒可能略有差异,请仔细阅读具体试剂盒的说明书。
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