小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-2274 小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的BMP-6浓度。

　　将BMP-6抗体预包被于微孔板，样本中的BMP-6与固相抗体结合

　　加入生物素标记的检测抗体形成夹心复合物

　　加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素，彻底洗涤后加入TMB底物显色

　　显色深浅与样本中BMP-6浓度呈正相关，450nm波长测定吸光度值

　　二、试剂盒组成

　　组分 规格 保存条件

　　预包被微孔板 96孔 -20℃干燥保存

　　标准品(冻干) 2瓶 -20℃

　　检测抗体A(HRP标记) 120μL -20℃

　　检测抗体B 120μL -20℃

　　标准品稀释液 20mL 2-8℃

　　洗涤液(30×) 20mL 室温

　　TMB底物 9mL 2-8℃避光

　　终止液 6mL 室温

　　注：需自备蒸馏水、酶标仪(450nm滤光片)、微量移液器及吸头、洗板机/洗瓶

　　三、样本处理

　　血清样本‌

　　全血室温静置30分钟或4℃过夜后，1000×g离心20分钟取上清

　　避免反复冻融，-20℃或-80℃保存

　　血浆样本‌

　　EDTA抗凝，离心条件同上

　　肝素血浆需验证无干扰

　　细胞上清‌

　　1000×g离心10分钟去除颗粒物

　　样本稀释‌

　　若浓度超出检测范围(0.75-24 ng/mL)，用标准品稀释液倍比稀释

　　推荐稀释比例：1:2、1:4、1:8、1:16

　　四、实验步骤

　　试剂准备‌

　　所有试剂提前20分钟平衡至室温(18-25℃)

　　洗涤液配制：20mL浓缩液+580mL蒸馏水(1:29稀释)

　　标准品梯度：

　　冻干标准品加1mL稀释液复溶(10,000pg/mL)

　　倍比稀释至78pg/mL(共7个浓度点)

　　检测抗体工作液：

　　检测溶液A/B各10μL + 990μL对应稀释液(1:100稀释)

　　加样‌

　　每孔加入100μL标准品/样本

　　37℃孵育90分钟

　　洗涤‌

　　洗板机洗涤3次，每次浸泡30秒，拍干

　　显色‌

　　每孔加100μL检测抗体工作液，37℃孵育60分钟

　　洗涤后加100μL TMB底物，避光显色15分钟

　　加50μL终止液终止反应(蓝色→黄色)

　　检测‌

　　450nm波长测定OD值，酶标仪需提前预热

　　五、数据分析

　　标准曲线拟合：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，四参数逻辑回归拟合

　　样本浓度计算：根据标准曲线插值法计算，乘以稀释倍数

　　线性范围验证：稀释回收率应在80%-120%之间

　　六、注意事项

　　试剂保存‌

　　未开封试剂盒：2-8℃保存6个月

　　开封后：微孔板加干燥剂密封-20℃保存

　　操作规范‌

　　避免液体接触皮肤，终止液含强酸，操作时戴手套

　　底物避光保存，显色后30分钟内读数

　　加样顺序一致，确保温育时间相同

　　质量控制‌

　　板内/板间变异系数<15%

　　空白孔OD值应<0.15

　　七、性能参数

　　检测范围：0.75-24 ng/mL

　　灵敏度：<0.1 ng/mL

　　特异性：不与BMP-2/4/7等结构类似物交叉反应

　　重复性：板内CV<10%，板间CV<15%

　　注：供科研使用，以上资料供参考，不作为实验依据，具体请咨询技术老师或品牌商。

　　小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生试剂盒