水产品中雌激素的测定

雌性激素（Estrogen），又称女性激素，是一类主要的女性荷尔蒙。分为两大类（均为类固醇激素），即雌激素和孕激素。雌性激素是雌性脊椎动物的性激素，具有促进第二性征出现的作用。过高的雌性激素会对男性的生殖系统产生明显影响，包括影响雄性激素的水平，导致内分泌紊乱，同样过高的雌激素会增大女性生病的概率，也会对青春期的孩子发育造成影响，故找到一种快捷高效的检测方法尤为重要。

本实验参考《GB 31660.2-2019 食品安全国家标准 水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的测定 气相色谱-质谱法》，利用GPC1000全自动凝胶净化系统对样品提取液进行净化，GC-MS进行检测，方法简单、快捷，能够很好地去除干扰物对目标物的影响。

关键词：

水产品；雌激素；凝胶净化

1.1 仪器与试剂

GPC1000全自动凝胶净化系统（北京莱伯泰科仪器股份有限公司）；

MVP 全自动高通量真空平行浓缩仪，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；

气质联用仪：7890B-5977B，安捷伦科技（中国）有限公司；

S-X3不锈钢凝胶净化柱（20*300mm，货号：Y020207015），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

E.T.氮吹浓缩仪，货号：C020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

甲醇、环己烷、乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

碳酸钠（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 工作液配制

混合标准工作溶液：分别精密量取标准储备液适量于10mL容量瓶中，甲醇定容，配成浓度为双酚A50μg/L，已烯雌酚100μg/L，雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇200μg/L的混合标准工作液。

取混合标准工作溶液50μL、100μL、200μL、500μL、1000μL于1.5mL样品瓶中，40℃氮吹至干，按1.3.3方法衍生，制成双酚A浓度均为2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L的梯度系列，已烯雌酚浓度均为5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的梯度系列，雌酮17a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇浓度均为10μg/L、20μg/L、40μg/L、100μg/L、200μg/L的梯度系列标准曲线。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

将水产品样品均质，称取5.0g样品，加入3mL100g/L的碳酸钠溶液，加入20mL乙酸乙酯，超声15min，5000r/min离心4min，取上清液，加入10mL乙酸乙酯复提，合并上清液后，40℃旋蒸至近干，加入8mL50%环己烷乙酸乙酯溶液复溶，混匀，待凝胶净化处理；同时做样品空白。

1.3.2 凝胶净化处理

按照下图所示的方法进行GPC1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的凝胶净化。收集洗脱液，40℃氮气吹干，待衍生。

1.3.3 衍生化

在1.3.2中的浓缩瓶中加入200μL丙酮，加入30μL七氟丁酸酐，用锡箔纸封口，在35℃水浴中衍生1h，用正己烷定容至1.0mL待测。

1.3.4 GC-MS 检测条件

色谱柱：HP-5MS 30m*0.25mm* 0.25μm

进样口温度：250℃，流速：1mL/min

不分流进样，1min后分流60mL/min

进样量：1μL

柱箱：120℃，保持2min，以15℃/min升至250℃，以5℃/min升至 300℃，保持5min

溶剂延迟：8.5min

离子源温度：230℃

四极杆温度：150℃

传输线温度：280℃。

表1 水产品中雌激素的回收率

图1 标准样品色谱图

图2 空白样品色谱图

图3 加标样品色谱图

本次实验展示了一种使用S-X3不锈钢凝胶净化柱（20*300mm，货号：Y020207015），对水产品中的雌激素测定的净化，回收率在70.5%~110.5%之间，重现性RSD为3.9-8.1%，回收率高、重现性良好，说明S-X3不锈钢凝胶净化柱，适用于水产品中的雌激素测定的净化，并且结果稳定、可靠。

[1] GB 31660.2-2019 食品安全国家标准 水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的测定 气相色谱-质谱法