柱效测试是评估层析柱性能的关键步骤,有助于监测层析柱的性能变化,及时发现和解决可能影响实验结果的问题。蛋白纯化仪如何进行柱效评价,今天就带大家来了解一下吧!
常规的柱效测试方法有以下两种:
方法一 | 方法二 | |
平衡液: | 水 | 0.4M NaCl |
样品: | 1%或2%丙酮 | 0.8M NaCl |
进样体积: | 1% CV | |
流速: | 30cm/h或60cm/h的线性流速 | |
检测信号: | UV280 | 电导 |
准备好对应的溶液后就可以开始柱效测试了!在设备上有两种方式进行柱效测试:第一种是手动操作,第二种是设置方法。
要是用loop环进样,只用冲洗A1,要是用系统泵进样要先冲洗A2,再冲洗A1。
柱子体积小时,进样体积小时可以用Loop环进样:可以在进样阀load状态把样品存进loop环里面(如要测的柱子进样体积比较小没有对应的loop环,可以用大一点的loop环多存一点样品)
Loop环进样有两种方式:
第一种:重新打开手动控制页面,线性流速会自动同步,直接在样品环进样中输入进样体积即可
第二种:手动切Inject状态,运行到进样体积时切回load状态(只适应满环进样)
如果柱子体积大时,进样体积大没有对应的大Loop环时,可以用系统泵进样。
第一种:在输液泵进样中选择入液口,选择A2、输入好对应的进样体积,点击执行即可。
第二种:在流路中选择切换到A2,同时在插入injection mark横把坐标归零,然后到进样体积时再切回A1。注意:每次实验只有第一次执行injection mark时会坐标归零。
第三种:用A1平衡好之后,暂停,把A1放入样品中到达上样体积时,再暂停,把入液管线放回平衡液。这种方法不推荐,原因如下:死体积比较大会导致出峰时间延迟,测出柱效会比实际柱效高很多、在来回移动管线过程中容易引入气泡。
无论是哪种手动操作,结束实验室一定要记得选择保存实验结果。
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