瑞士步琦
可水解天然单宁的快速分离与纯化
Pure 应用
”
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简介
单宁是源自酚酸（有时称为单宁酸）的复杂化学物质。它们被归类为酚类化合物，存在于许多植物物种中，常见于树皮、木材、叶片、芽、茎、果实、种子、根和植物瘿中。
植物单宁分为可水解单宁和源自类黄酮的缩合单宁。可水解单宁可进一步分为鞣花单宁和没食子单宁。鞣花单宁与没食子单宁的不同之处在于，其没食子酰基通过 C-C 键连接，而没食子单宁中的没食子酰基则通过缩酚酸键连接。鞣花单宁含有不同数量的六羟基联苯二甲酰基单元，以及连接在糖部分上的没食子酰基单元和/或地榆酰基单元。
在本研究中，我们专注于纯化源自诃子 (Terminalia Chebula Retz) 的鞣花单宁，即诃子鞣酸与诃黎勒鞣酸。它们具有非常广泛的药用特性，包括免疫抑制、保肝、葡萄糖苷酶抑制等。它也是古代阿育吠陀草药配方"三果宝"的主要成分之一。最近的药物研究也揭示了诃黎勒鞣酸作为一种有效的抗肿瘤剂的用途。
▲ 图1. 诃子鞣酸与诃黎勒鞣酸
2
设备
▲ C-815
Pure C-815 快速制备液相色谱
FlashPure ID C18 80g 快速柱
3
试剂与材料
天然单宁粗提物。
甲醇 (Rankem, HPLC 级)。
去离子水，含 0.1% 甲酸。
潜在健康影响：请查阅相应的材料安全数据表。
防护：穿戴适当的防护设备。
4
实验过程
4.1 消化方法 – 色氨酸 (方法验证)
精确称取 5.0g 提取物，置于 10mL 容量瓶中。加入 20% 甲醇水溶液至刻度线以下，将容量瓶超声处理 10 分钟以使提取物完全溶解。然后将溶液定容至刻度线并混匀。
4.2 流动相
溶剂 A：在 900mL 去离子水中加入 1mL 甲酸，然后定容至 1000mL，用 0.45μm 孔径的膜过滤，并在超声清洗器中脱气 3 分钟。
4.3 色谱条件设置
表 1. 快速色谱柱的色谱条件
进样体积 | 5mL (500mg/mL，溶于 20% 甲醇水溶液) | |
色谱柱 | 色谱柱：BUCHI FlashPure ID C18 80g | |
流速 | 25 mL/min | |
检测条件 | UV 210 nm UV 271 nm UV 280 nm | |
溶剂 A | 水(含 0.1% 甲酸) | |
溶剂 B | 甲醇 | |
梯度洗脱 | Time(min) | % B |
4 | 10 (hold) | |
0.5 | 10-20 | |
4 | 20 (hold) | |
0.5 | 20-25 | |
4 | 25 (hold) | |
0.5 | 25-30 | |
4 | 30(hold) | |
0.5 | 30-40 | |
8 | 40 (hold) | |
0.5 | 40-45 | |
3 | 45 (hold) | |
0.5 | 45-50 | |
6 | 50(hold) | |
2 | 50-100 | |
8 | 100 (hold) | |
5
实验结果与讨论
收集了两个馏分并在减压条件下干燥，得到白色无定形粉末。对该粉末进行 HPLC 分析，以使用相应的标准品进行纯度确认和测定。
6
实验结论
使用建议的方法，结合 Pure C-815 快速制备液相色谱和 FlashPure ID C18 色谱柱，可以实现可水解单宁的分离和纯化。诃子鞣酸的纯度从 15% 富集到 >85%，诃黎勒鞣酸从 22% 富集到 96.5% (经 HPLC 验证)。
* 方法可能需要根据原料质量进行优化。
** 纯度可能因原料和提取物中存在的化合物数量而异。
7
参考文献
K. Chung, T. Wong, C. Wei, Y. Huang, Y. Lin. (1998) Tannins and Human Health: A Review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 38(6):421–464
K. Sharma et al. (2019) Health effects, sources, utilization and safety of tannins: a critical review. Toxin Reviews.
Terminalia chebula Fruit – Identification. USP herbal medecine compendium.
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