超临界流体色谱

　　超临界流体色谱(SFC)分离是以超临界流体做流动相，依靠流动相的溶剂化能力来进行分离、分析的色谱过程，超临界流体对物质的溶解能力比一般气体大得多，相当于有机溶剂，但比有机溶剂的扩散速度快、黏度低、表面张力小。

　　超临界流体色谱兼有气相色谱和液相色谱的特点。它既可分析气相色谱不适应的高沸点、低挥发性样品，又比GX液相色谱有更快的分析速度和条件。

超临界流体色谱

　　所谓的超临界流体色谱法，其实就是一种以固体吸附剂或高聚物为固定相，以超临界流体为流动相的色谱分析方法。相较于使用GX液相色谱法(HPLC)，使用超临界流体色谱法对药物的有效成分进行分离可以实现更大的分离度，并且使用此方法进行分离的用时更少，消耗的有机溶剂也更少。

　　近年来，为了更好地应用超临界流体色谱法，美国等发达国家已经成功研制出了超临界流体色谱仪。超临界流体色谱仪一般由四部分组成，即高压泵、色谱柱、样品收集系统和检测系统。

　　超临界流体色谱仪一般采用二氧化碳流体作为流动相，主要是由于二氧化碳流体具有无色、无毒和易于获取等多种优点，并且可以很好地对各类有机物进行溶解。

　　但是，在使用以二氧化碳流体作为流动相的超临界流体色谱法进行药物成分分析时，由于部分药物具有一定的极性，所以还需要在流动相中添加甲醇等改性剂。

超临界流体色谱分离方法

　　1、直接分离法

　　超临界流体色谱拆分药物对映体一般可分为直接法和间接法两类。直接分离法可分为手性固定相法(CSPs)和手性流动相添加剂法(CMPA)。

　　手性固定相法(CSPs)：

　　CSPs法是通过使用一个具有光学活性的环境即手性固定相来提供拆分所需要的手性ZX，目前有150多种商品化的手性固定相，本文将对其进行分类并就其在超临界流体色谱中的应用进行详细综述。

　　手性流动相添加剂法(CMPA)：

　　CMPA法为手性添加剂吸附到固定相表面形成非对映体复合物，该立体反应发生在流动相中，包括手性包含复合法、手性配合交换法和手性离子对色谱法。

　　手性包含复合法经常采用的添加剂是环糊精(CD)和手性冠醚。环糊精对疏水性和亲水性药物对映体都具有很强的包合作用。此法采用的固定相常为ODS、CN、C8、苯基、硅胶等。检测方法多用UV和电导检测法(ECD)。

　　手性配合交换法是将手性金属配合剂加入流动相中形成三元非对映体配合物，此配合物与固定相发生立体选择性吸引或排斥反应，因其结构稳定性和能量的差异，使对映体得以分离。配合交换系统使用反相柱、疏水性固定相、水性流动相和UV检测系统。溶质疏水性增加，保留时间延长。

　　手性离子对色谱法是在流动相中加入反离子，使之与流动相中的对映体生成非对映的离子对复合物。因离子对复合物与固定相发生静电，疏水或氢键作用产生差速迁移而得以分离。

　　Salvador等在CO₂和极性改性剂的混合流动相中加入甲基化β-环糊精获得了较好的手性分离。CMPA法分析过程较少发生消旋化，添加剂选择的范围也宽，但添加剂在固定相表面的动态吸附平衡时间长，致使添加剂消耗大。

　　2、间接分离法

　　间接分离法主要是指手性衍生化试剂法(CDR)。

　　CDR是先将手性衍生化试剂与药物外消旋体反应，通过共价结合后在对映体分子中引入另一个手性ZX，形成非对映体，再在非手性柱(也可用手性柱)上分离。此法应用的手性化合物对映体的化学结构中应具有易于衍生化的基团，如氨基、羧基、羟基或巯基等。

　　手性试剂除了和反应产物须有稳定的化学和手性性质，还须具有高的化学和光学纯度，在贮存中不发生改变。

超临界流体色谱法在药物成分分析中的应用

　　1、超临界流体色谱法在药物有效成分分离方面的应用

　　在进行药物成分分析的过程中，可以使用超临界流体色谱法对药物的有效成分进行分离。相较于GX液相色谱法，超临界流体色谱法具有更高的分离效率。

　　超临界流体色谱法可以在样品纯化和对照品制备等方面取得更好的应用效果。例如，在对多不饱和脂肪酸进行分离时，相较于使用GX液相色谱仪，使用制备型超临界流体色谱仪可以对含有多不饱和脂肪酸的产物进行更好的提纯，并且可以获得更高的产量。

　　2、超临界流体色谱法在手性药物成分分析方面的应用

　　在对手性药物的成分进行分析时，由于此类药物在不同对映体体内的毒性、药理活性和代谢过程存在较大的差异，所以需要先对此类药物进行手性拆分，并在获得其立体异构体后对其进行成分分析。

　　在使用超临界流体色谱法对手性药物的成分进行分析的过程中，我们可以对手性药物中每一对立体异构体的药效和毒理作用进行明确和量化。近年来，超临界流体色谱法已经成为对手性药物的立体异构体进行拆分的shou选方法。

　　使用超临界流体色谱法可以对手性药物的成分进行准确的分析。相较于使用GX液相色谱法，使用超临界流体色谱法对肾上腺皮质激素类手性药物固定相进行分离的用时更短，相当于使用GX液相色谱法进行分离用时的三分之一。

　　超临界流体色谱法的流动相(二氧化碳流体)具有无毒、无味的优点，所以，使用超临界流体色谱法对手性药物的成分进行分析可以减少对室内环境的污染和检测人员的毒害。

　　3、超临界流体色谱法在中药成分分析方面的应用

　　作为现代色谱技术中的一种，超临界流体色谱法的出现使中药的现代化进程得到了推动。近年来，在对中药的有效成分进行分析、分离和提纯等方面，超临界流体色谱法都得到了较为广泛的应用。

　　使用超临界流体色谱法和高灵敏度通用型FID检测器可以对中药和中成药中的有效成分进行准确的分离和鉴别。例如，在对野甘菊中的小白菊内酯进行分析时，使用超临界流体色谱法进行分析可有效地缩短分析的用时。

　　由于中药中往往含有糖、黏液质等物质，所以在对中药的成分进行分离时，需要先对药物进行净化处理，以防止超临界流体色谱仪的色谱柱遭到污染。

　　4、超临界流体色谱法在药物代谢产物成分分析方面的应用

　　使用超临界流体色谱法可以对药物代谢产物的成分进行准确的分析。例如，在对药物紫杉醇的代谢产物进行分析时，就可以使用以甲醇和二氧化碳流体为流动相的超临界流体色谱法对其代谢产物的成分进行分析。

　　通过对药物代谢产物成分的分析，可以为该药物的稳定性试验提供重要的试验依据。例如，在对扑米酮和氯氮平等药物进行稳定性试验前，就可以使用超临界流体色谱法对其代谢产物的成分进行分析。