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按照DNA扩增的目的和检测的标准,PCR仪被分为四种类型,分别是实时荧光定量PCR仪、原位PCR仪、梯度PCR仪以及普通PCR仪。
分类
实时荧光定量PCR基因扩增仪
将计算机分析处理系统和荧光信号采集系统加入到普通PCR仪,叫做荧光定量PCR仪。其和普通PCR仪有着相同的PCR扩增原理。只是其PCR扩增时,利用同位素、荧光素等对加入的引物进行标记,使引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。通过荧光信号采集系统实时采集信号然后输送到计算机分析处理系统获得量化的实时结果。
荧光定量PCR仪包括单通道、双通道和多通道。若仅使用一种荧光探针标记,怎选用单通道,若有很多荧光探针标记的时候,就选择多通道。多荧光的标记的目的基因表达产物也能够通过单通道检测出来。由于一次只能够将一种目的基因的扩增量检测出来,因此检测完不同目的基因片段的量则需多次扩增。其主要在医学临床检测、生物医药研发、食品行业、科研院校等机构使用。
原位PCR基因扩增仪
被用来对细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪,被叫做原位PCR仪。例如目的基因在细胞内的作用位置或者病源基因在细胞的位置等。细胞或组织保持完整,使得PCR反应体系在组织和细胞中渗透,在细胞的靶DNA所在位置上进行基因扩增,不仅能够对靶DNA检测,还能将靶序列在细胞内的位置标出。其在临床过程及病理的转变和在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理方面的实用价值非常重大。其在临床、科研方面被应用。
梯度PCR基因扩增仪
一系列不同的退火温度条件能够通过一次性PCR扩增进行设置的PCR仪被叫做梯度PCR仪。由于被扩增的DNA片段不同,其Z适合的退火温度也不一样,对一系列的梯度退火温度进行设置,从而一次性PCR扩增,就能够将表达量高的Z适合的退火温度筛选出来,进行有效的扩增。可以被用作对未知DNA退火温度的扩增进行研究,如此不仅使成本得到节约,而且也使时间得到了节省。如果不设置梯度,那么梯度PCR仪也可以作为普通PCR扩增使用。其主要在科研、教学机构使用。
普通PCR基因扩增仪
一个特定退火温度仅可以由一次PCR扩增运行PCR仪,指的就是普通PCR仪。若要做不同的退火温度,那么需要运行多次。其主作用要是扩增目的基因退火温度。该仪器在科学研究、教学、医学临床、检验检疫等机构得到广泛地应用。
PCR的反应动力学
DNA扩增量随着PCR的三个反应步骤的重复循环进行而呈指数级增长。实际反应初期,靶序列DNA片段呈指数级增加,当PCR产物的逐渐积累时,被扩增的DNA片段不再呈指数增加,此时进入线性增长期或静止期,使得平均效率达不到理论值。
06-19
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