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核酸提取仪CTAB法

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CTAB法是提取DNA主要的方法,其他方法还有生物方式:酶法,化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法,物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。


分类

细胞器DNA、细胞核DNA。

单链环状、双链线性、双链环状。

组织DNA、细胞悬液DNA、、病毒DNA、质粒DNA、真核生物DNA、细菌DNA。


提取原则

1.应当将如蛋白质、多糖和脂类分子等其他生物大分子的污染应降低到Zdi程度。

2.应当尽可能去除如RNA的其他核酸分子。

3.使核酸一级结构的完整性得以保证。

4.不应当有对酶有YZ作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子存在于核酸样品中。


3.jpg

提取方法

1.表面活性剂快速制备法

使用Triton X-100A或NP40表面活性剂对细胞破碎,然后使用蛋白酶K或酚将蛋白去除,使用乙醇沉淀或透析。


2.加热法快速制备

温度96℃-100℃加热5min,之后离心后取上清,能够在PCR反应时使用。


3.碱变性快速制备

首先使用NaOH作用20min,再将HCI加入中和,离心后取上清,含有少量DNA。


4.玻璃棒缠绕法

使用盐酸胍对细胞进行裂解,在乙醇上铺上裂解物,然后在界面使用带钩或U型玻璃棒轻搅,在玻棒绕DNA沉淀液,使得80kbDNA生成。


5.异丙醇沉淀法


6.酚抽提法

首先使用蛋酶K、SDS对细胞进行破碎,化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb。


7.甲酰胺解聚法

和上面方法一样先将细胞破碎,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得200kb左右DNA。


2005-08-12 浏览次数:1815次
本文来源:https://www.yiqi.com/daogou/detail_3796.html
热门标签: DNA提取过程中细胞裂解原理和方法 核酸提取方法介绍 核酸提取仪介绍和特点
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