GB31658.22-2022动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定-解决方案

根据《中华人民共和国食品安全法》规定，经食品安全国家标准审评委员会审查通过，国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局和农业农村部联合发布的《食品安全国家标准 食品中41种兽药最大残留限量》(GB 31650.1-2022)及21项兽药残留检测方法食品安全国家标准，2023年2月1日即将实施。

新标准挑战

新标准中《GB 31658.22-2022动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定》，收到了许多检测单位的反馈，

新标准的前处理过程太复杂（繁琐的提取过程，费时费力的pH调节，叔丁基甲醚提取后漫长的氮吹，SPE的活化、上样、平衡、洗脱，又一次漫长的氮吹……）。

此外，新标准需同时检测18种β-受体激动剂，这对色谱柱分离能力要求比较高。

根据广大用户反馈的问题，纳鸥科技的技术团队，春节前后加班加点，大年初十，赶在标准正式实施之前，第一时间快速推出了更简单、更高效的前处理和色谱分析方法。

方法简介&优势

方法摘要：

参考《GB 31658.22-2022 食品安全国家标准动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，建立了UPLC-MS/MS法测定动物性食品中18种β-受体激动剂的检测方法：利用5%甲酸乙腈溶液作为提取溶剂，加入Anavo Que Extraction Salt Tube萃取盐包后，使用Anavo HMR-Lipid萃取柱净化，氮吹复溶后，采用Anavo PFP/C18色谱柱分离检测，同位素内标法定量。

方法优势：

本方法前处理简单，采用的是HMR-lipid通过式去除杂质的净化模式，省去使用阳离子固相萃取柱活化、平衡、淋洗等繁琐流程，处理液可直接上样净化。定量限0.4 ug/kg，回收率在86.0%-115.4%之间。

注：GB 31658.22-2022标准中使用的是混合型阳离子交换固相萃取柱保留目标化合物的净化模式，此净化模式过程繁琐。

前处理过程对比：

实验关键点和注意点：

ü  采用5%甲酸乙腈溶液作为提取溶剂，可有效提高目标化合物回收率。

ü  使用Anavo HMR-Lipid萃取柱净化，可快速、高效净化样品，提高检测效率。

ü  采用Anavo PFP/C18核壳色谱柱分离检测，目标化合物峰形对称，利于化合物定性、定量检测。

实验流程

1、酶解与提取

取试料5g（准确至±0.02），于50 mL离心管内，加0.2 mol/L乙酸铵缓冲溶液6 mL、β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40 μL，涡旋混匀， 37℃避光水浴振荡16h，放置至室温，备用。

2、萃取、净化

取备用液，加入浓度为100 μg/L混合内标使用液125 μL，加入3 mL纯水，涡旋混匀，加入5%甲酸-乙腈溶液10 mL，涡旋1 min，加入Anavo Que Extraction Salt Tube 萃取盐包（PN：AN50A007），涡旋1 min，在 4℃下，以10000 r/min离心 10 min，取4 mL上清液，加入1 mL纯水混匀，直接经过Anavo HMR-Lipid净化柱（PN：AN60F035）净化，流出液氮吹近干，用30%乙腈溶液定容至1 mL，过0.22 µm微孔滤膜，LC-MS/MS测定。

3、色谱条件

色谱柱：Anavo PFP/C18核壳柱, 2.7µm, 100* 2.1mm（PN：AN80A001）

流动相：A相为0.1%甲酸溶液，B相为0.1%甲酸乙腈溶液。流动相梯度：0-0.5 min保持5%B；0.5-5 min，5%B上升到60%B，5-6.5 min，保持95%B,6.5-8.5 min保持5%B。

柱温：30℃

进样量：5 uL

流速：0.4 mL/min

4、质谱条件

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：正离子扫描；

检测方式：多反应离子监测（MRM）；

电喷雾电压：5500 V；

离子源温度：550℃；

辅助气1：50 psi；

辅助气2：60 psi；

气帘气：30 psi；

碰撞气体：Medium。

表1  待测化合物定性、定量离子对和对应的去簇电压、碰撞能量参考值

注：溴布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗和克仑潘特采用莱克多巴胺同位素内标定量。

5、实验数据

表2 18种化合物加标回收率范围及RSD

6、 谱图

图1 18种化合物及内标总离子流图

图2 18种化合物及内标特征离子质量色谱图

 GB31658.22-2022标准关键耗材

注：

*：如果您单位需严格遵照国标进行前处理，也可以选择AN60A012混合型阳离子交换反相柱进行净化。

*：Anavo PFP/C18核壳柱等同于标准中的五氟苯基柱，这款色谱柱不但具有PFP柱的优势，对于结构类似化合物具有较好分离效果，同时具有C18柱分离的优势。