细胞培养的步骤及注意事项您需知

　　细胞培养的步骤和注意事项您需知

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5. 3天换一次培养基。

　　二、 传代

　　1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培养基吸掉。

　　3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、 冻存

　　把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。

　　冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

　　细胞培养的步骤和注意事项 先和大家介绍到这，如果想要了解更多细胞培养的信息，可以关注天津本生生物，专业给生物行业客户提供生物实验室检测耗材，欢迎广大客户来询。

　　细胞培养的步骤及注意事项

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5. 3天换一次培养基。

　　二、 传代

　　1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培养基吸掉。

　　3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。 冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

　　细胞培养的步骤及注意事项,先和大家介绍到这，如果想要了解更多离心管的信息，可以关注天津本生生物，业给生物医药客户提供生物实验室检测耗材，欢迎广大客户来询。

　　移液管的使用步骤：

　　1、使用时应先将移液管洗净，自然沥干。

　　2、用待量取的溶液润洗2-3次，用右手拇指及中指捏住管颈标线以上的地方。

　　3、左手拿像皮球轻轻将溶液吸上，眼睛注意上升的液面。

　　4、当液面上升到标线约1cm以上时，迅速用右手食指堵住管口。

　　5、取出移液管，用滤纸拭干移液管下端及外壁。

　　6、稍稍松开右手食指，使液面缓缓下降，至凹液面与标线相切。

　　7、再将移液管移入准备接受溶液的容器中，使其出口接触器壁。

　　8、容器稍微倾斜，移液管直立，使溶液自由的顺壁流下。

　　9、此时移液管仍残留有一滴液体，不可吹出。

　　移液管的注意事项：

　　1、移液管(吸量管)不应在烘箱中烘干。

　　2、移液管(吸量管)不能移取太热或太冷的溶液。

　　3、同一实验中应尽可能使用同一支移液管。

　　4、移液管在使用完毕后，应立即用自来水及蒸馏水冲洗干净，置于移液管架上。

　　5、移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作两者的相对体积校准。

　　6、在使用吸量管时，为了减少测量误差，每次都应从最上面刻度(0刻度)处为起始点，往下放出所需体积的溶液，而不是需要多少体积就吸取多少体积。

　　7、移液管有老式和新式，老式管身标有“吹”字样，需要用洗耳球吹出管口残余液体。新式的没有，千万不要吹出管口残余，否则引起量取液体过多。

　　移液管的使用步骤及注意事项!先和大家介绍到这，如果想要了解更多移液管的信息，可以关注天津本生生物，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。

　　移液管润洗的步骤及注意事项？

　　移液润洗步骤

　　1、先用自来水淋洗后，用铬酸洗涤液浸泡，操作方法如下：

　　(1)用右手拿移液管上端合适位置，食指靠近管上口，中指和无名指张开握住移液管外侧，拇指在中指和无名指中间位置握在移液管内侧，小指自然放松;

　　(2)左手拿洗耳球，尖口向下，排出球内空气，将吸耳球尖口插入或紧接在移液管上口，注意不能漏气。慢慢松开左手手指，将洗涤液慢慢吸入管内，直至刻度线以上部分，移开吸耳球，迅速用右手食指堵住移液管上口，等待片刻后，将洗涤液放回原瓶;

　　(3)用自来水冲洗移液管内、外壁至不挂水珠，再用蒸馏水洗涤3次，控干水备用。

　　2、待取溶液润洗：

　　(1)摇匀待吸溶液，将待吸溶液倒于一洗净干燥的小烧杯中，将清洗过的移液管JD内外的水分吸干;

　　(2)插入小烧杯中吸取溶液，当吸至移液管容量的1/3时， 立即用食指按住管口，取出，横持并转动移液管，使溶液流遍全管内壁，后将溶液从下端尖口处排入废液杯内;

　　(3)如此操作，润洗了3-4次后即可吸取溶液。
 

　　注意事项：

　　1、移液管不可在烘箱中烘干。

　　2、移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作两者的相对体积校准。

　　3、在使用吸量管时，为了减少测量误差，每次都应从最上面刻度(0刻度)处为起始点，往下放出所需体积的溶液，而不是需要多少体积就吸取多少体积。

　　4、需注意移液管管身是否标有“吹”字样，若有，则需要用洗耳球吹出管口残余液体。若没有，千万不要吹出管口残余，否则引起量取液体过多。

　　5、移液管不能移取太热或太冷的溶液。

　　扩展资料：

　　移液管调节液面操作方法：

　　1、取一干净小烧杯，将移液管管尖紧靠小烧杯内壁，小烧杯保持倾斜，使移液管保持垂直，刻度线和视线保持水平。

　　2、稍稍松开食指，使管内溶液慢慢从下口流出，液面将至刻度线时，按紧食指，停顿片刻，再按上法将溶液的凹液面ZD端放至与标线上缘相切为止，立即用食指压紧管口。

　　3、将尖口处紧靠烧杯内壁，向烧杯口移动少许，去掉尖口处的液滴。将移液管小心移至承接溶液的容器中。
 

　　移液管润洗的步骤及注意事项，本生生物小编就分享到这了，看完本文您就应该有了基本的认识和了解相信大家都明白了吧!总的来说，希望对大家有所帮助。

　　本生生物供应实验耗材齐全：产品涵盖有荧光定量PCR耗材(八联管,单管,96孔板,384孔板,封板膜,辅助器等)，ELISA试剂盒，移液器吸嘴，离心管，冻存管，培养皿，培养板，培养瓶，吸头，仪器及手套，培养基，抗体，血清，色谱耗材，针头过滤器及实验室常用耗材。 品种类超过万种，广泛应用于科研院校、ZX实验室、分子生物学等科研领域。

　　本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

试验操作步骤：

1、 把测试电流主机数据线和加热装置数据线，分别与电脑连接好

2、 把电极线与电流主机连接好，（红色线-电压，黑色线-接地，BNC接头-电流） 

3、 把测试试样平整放置在平板电极上，并把上电极居中放置好

4、 打开烘箱开关，和测试电流主机电源开关（建议供电后预热几分钟）

5、 打开试验软件，输入试验参数后，点开始试验

6、 试验结束后，会有提示，可以对数据进行保存和导出。

7、 连续做下次试验时，只需要更换试样即可。

设备组成：

1、高电阻微电流测量仪

2、电热恒温加热试验箱

3、测试电极

4、测试系统

注意事项

   1、开机顺序：先开主机，再打开软件

   2、试验环境：好是通风环境

   3、加热功率：大于1.5KW

   4、测试过程：测试过程中，不要触摸数据线

   5、屏蔽干扰：远离有磁场干扰的测试设备

　　手持式组织研磨器按照其功能特性大致可分为：组织研磨器、组织捣碎匀浆机，可调高速分散器（匀浆机），固体样品粉碎机。其中手持式组织研磨器是生物、遗传、病毒、医学、环保、水产、实验室、分析室、教育科研的研磨工具，但不适宜用于粘度高的液体和质料硬的物体（骨、石等）。今天上海净信来为大家介绍手持式组织研磨器的使用说明，具体包括使用步骤、使用注意事项和使用范围等。

　　一、手持式组织研磨器使用步骤

　　1、正确安装捣碎浆棒，放置捣碎浆杯。

　　2、将样品放入捣碎匀浆杯。

　　3、检查电源电压是否符合设备需求电压

　　4、接通电源，指示灯亮。

　　5、设定定时，可将定时旋钮调至“定时”或“常开”位置。

　　6、设定转速，缓慢调节调速旋钮，升至所需转速。

　　7、工作完毕，将调速旋钮置于较为小位置，定时器置“零”。

　　8、关闭开关和电源。

　　9、擦洗清洁匀浆杯和匀浆棒，然后进行烘干，其上不允许有水滴物、积垢和其它异物残留。

　　二、手持式组织研磨器使用注意事项

　　1、设备必须具有接地安全装置。

　　2、设备使用的电源插座必须是符合要求的三线插座。

　　3、开机之前，必须注意电源与电机上电压是否相符。

　　4、设备工作时应将放置平整紧固的台面上，以防止振移是用手按住杯盖。

　　5、先将刀轴和机轴配合好，后将联接器弹簧性元件向下移至尺槽内，机器才好运转。

　　6、不宜空转，使用时须加入少量液体或油脂。

　　7、放入物料时须缓缓加入，先由慢速逐步调至高速

　　8、更换溶液时，应切断电源后重复上述操作

　　9、连轴节上下滑动较困难时，应注入一至二滴机油，使之润滑。

　　10、匀浆机禁止捣碎骨类，矿砂等较坚硬的物质。

　　三、手持式组织研磨器具体使用范围

　　1、科学研究：生化、植物、营养等研究的捣碎、均质用。

　　2、医学治疗：实验室于药品捣碎，特别适合于组织治疗法药品捣碎。

　　3、化工制药：制造胶质乳浊体、液体物质之搅拌混合，如制造油质有霉素剂的调和，制造容缩牛肝捣碎均质等。

　　4、生物制造品：适用于生物制造品过程中，其液体药品的搅拌混合及微生物培养基的捣碎均

　　5、食品行业：可供制造肉酱、奶酪等使用。

　　本生阐述：elisa操作步骤说明及注意事项

　　酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。要知道elisa操作步骤首先我们先了解一下elisa的原理是什么。

　　elisa的原理：

　　①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

　　②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性， 又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物， 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据焰色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到 很高的敏感度。

　　elisa操作步骤：

　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越 强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则 410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　方法二　用于检测未知抗体的间接法：

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日 洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔 中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体

　　以上是elisa操作步骤，那么在elisa操作步骤的操作步骤中需要注意什么呢?下面是elisa实验的注意事项：

　　1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

　　2.在elisa操作步骤中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：固相载体的选择、包被抗体(或抗原)的选择、酶标记抗体工作浓度的选择、酶的底物及供氢体的选择

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　　离心管的注意事项您知道吗?

　　离心管的使用注意事项。离心管所装的物体都非常少，少量的气体、液体或者固体，少量也是有标准的，一般装溶液时不超过试管容量的1/2，加热时不超过试管的1/3。

　　在与其他器具使用时也有特殊的规定，用滴管往离心管内滴加液体时不能伸入离心管口;取块状固体放入离心管要用，不能使直接固体坠入离心管中，防止离心管底破裂;加热使用离心管夹、离心管口不能对着人。加热盛有固体的离心管时，管口稍向下，加热液体时倾斜约45°

　　离心管特点：

　　外形：尖形底，搭扣盖

　　是否无菌：无菌

　　包装：100个/包

　　材料：PP(聚丙烯)

　　离心力：12000xg

　　温度范围：-80℃-121℃，可在121℃/15psi灭菌15分钟

　　应用范围：主要用于细胞生物学、分子生物学、生物化学、临床及环境研究等领域。

　　离心管的注意事项您知道吗?我司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　细胞培养常见问题的原因及解决方法

　　1. 培养液pH值变化太快：

　　CO2张力不对。培养瓶盖拧得太紧。NaHCO3缓冲系统缓冲力不足。培养液中盐浓度不正确。细菌、酵母或真菌污染。

　　按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。(2)改用不依赖CO2培养液。

　　松开瓶盖1/4圈。

　　加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。

　　在CO2培养环境中改用基于Earle’s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hank’s盐配制的培养液。

　　丢弃培养物或用抗生素除菌。

　　2. 培养液出现沉淀，但pH值不变：

　　用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来。冰冻保存培养液。

　　用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。

　　将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。

　　3. 培养液出现沉淀，同时pH 发生变化：

　　细菌或真菌污染。

　　丢弃培养物或用抗生素除菌。

　　4. 培养细胞不贴壁：

　　胰蛋白酶消化过度;支原体污染;培养液中无贴壁因子。

　　缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。

　　分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

　　5. 悬浮细胞成簇：

　　培养液中含钙、镁离子。支原体污染。蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA。

　　用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。

　　分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。

　　用DNase I处理细胞。

　　6. 原代细胞培养物污染：

　　原代培养组织在进入培养前已污染

　　培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。

　　7. 培养细胞死亡：

　　培养箱内无CO2。培养箱内温度波动太大。细胞冻存或复苏过程中损伤。培养液渗透压不正确。培养液种有毒代谢产物堆积。

　　检测培养箱内CO2

　　检查培养箱内温度

　　取新的保存细胞种

　　检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260–350mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。

　　换入新鲜培养液

　　8. 培养细胞生长减慢：

　　由于更换不同培养液或血清。培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。培养物中有少量细菌或真菌污染。试剂保存不当。

　　比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。

　　增加起始培养细胞浓度。

　　让细胞逐渐适应新培养液。

　　换入新鲜配制培养液。

　　补加谷氨酰胺或生长因子。

　　用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。

　　血清需保存在-5℃ 到-20℃。培养液需在2–8℃避光保存。含血清培养液在2–8℃保存，并在2周内用完。

　　接种细胞起始浓度太低，细胞已老化，支原体污染。

　　增加接种细胞起始浓度。

　　换用新的保种细胞。

　　分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

　　细胞培养常见问题的原因及解决方法，我司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。   既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　离心管的选购注意事项您知道吗?

　　离心管样品悬浮液盛放在管状试样容器中，在离心机的高速旋转下，由于巨大的离心力作用，使悬浮的微小颗粒(如细胞器、生物大分子的沉淀等) 以一定的速度沉降，从而与溶液得以分离。这种带密封盖或压盖的管状试样容器，就是离心管。

　　按容积分为：

　　大容量离心管(500mL、250mL)等

　　普通离心管(50mL、15mL)等

　　微量离心管(2mL、1.5mL、0.65mL、0.2mL)等

　　按材料分为

　　1、玻璃离心管

　　此类离心管因其易碎的品质，高速离心机一般不选用玻璃管，使用不多。

　　2、钢制离心管

　　钢制离心管强度大，不变形，能抗热，抗冻，抗化学腐蚀。

　　3、塑料离心管

　　塑料离心管的优点是透明或者是半透明的、硬度小，可用穿刺法取出梯度、便宜。缺点是易变形，抗有机溶剂腐蚀性差，使用寿命短。

　　按管底形制分为

　　1.尖底离心管 2. 圆底离心管

　　按管盖形制分为

　　1. 连盖离心管 2. 插口离心管 3. 螺口离心管

　　管盖的作用

　　作用就是防止样品外泄，尤其是用于有放射性或强腐蚀性的样品时。另一个作用是防止样品挥发以及支撑离心管，防止离心管变形。

　　离心管的材料

　　塑料离心管的常用材料有聚乙烯(PE)，聚碳酸酯(PC)，聚丙烯(PP)等，其中聚丙烯PP离心管性能会相对较好，

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