TRIZOL配制方法以及使用方法

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制ZX、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编带你了解一下TRIZOL配置方法以及使用方法。

配制方法

将以下物质加入到2000ml的烧杯中，混合均匀：

17.6mL 0.75M 柠檬酸钠溶液（pH≥7）

26.4mL 10%sarcosy（十二烷基肌氨酸钠）溶液

50mL 2M NaAc溶液（pH≥4）

500ml重蒸苯酚

250g异硫氰酸胍

293mL蒸馏水

应当在4℃低温下保存TRIzol。

注意：

1.NaAc等盐类的作用是提供缓冲环境

2.水和苯酚部分互溶，Trizol中苯酚被水饱和，使均匀溶液形成。

使用方法

此方法用于提取细胞中的RNA，使用匀浆器磨碎组织，将TRIzol加入进行组织的处理。5min中以后将氯仿加入，以12000r/min离心5min，样品被分成有机层、中间层以及水样层。RNA在水样层中，收集水样层后，RNA可以利用异丙醇沉淀获取。

在将水样层去除以后，也可以通过沉淀的方式相继获取中间层中的DNA和蛋白质。中间层的DNA可以通过乙醇沉淀析出，将异丙醇加入到中间层可以将蛋白质沉淀出来。

每100ml TRIzol能够将100个50-80mg的组织样品或100个六孔板中的样品抽提出来。不管样品来自于何处，使用该方法分离少量的组织（50-100mg)和细胞（约五百万个）及大量的组织（≥1g）和细胞（超过一千万个）的效果都比较好。

TRIzol操作上的简便性使多个样品的同时处理得到允许，能够在一小时内完成所有的操作。

TRIZOL抽提的总RNA可以使DNA和蛋白的污染得以避免。所以可以用于分子克隆、RNA酶保护分析、体外翻译、poly(A)+ 选择、斑点杂交、RNA印迹分析。

若用于PCR，当在单一外显子内有两条引物时，总RN的处理抽提使用级联扩大的DNase I(Cat. No. 18068）。