DNA合成仪操作步骤

用于和DNA或RNA结构类似的寡核苷酸合成的自动化仪器，即是DNA合成仪。通常用于固相合成法，每次在长的寡核苷酸链上接入一个核苷酸。加入每一个核苷酸均通过相同的化学反应和相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。仪器不同，所用化学反应和操作细节也会随之发生变化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常广泛的应用。

操作步骤

亚磷酰胺DNA合成的试剂：

氨水切除溶液

乙腈清洗溶剂

12氧化混合物

三lv乙酸(TCA)脱保护溶液

N—甲基咪唑封闭试剂

乙酐

四唑偶联催化剂

A、G、C、T亚磷酰胺单体

保护碱基的5/—DM

以以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例，操作步骤如下：

1、对合成仪上所有试剂瓶中的试剂量认真检。

2、在合成仪上装上标记好的干净的收集瓶。

3、在合成仪中输入要合成的DNA序列。

4、对选择的合成步骤进行检查。

5、选择结束方法：仪器的原始状态为TritylOffAuto，如果想要通过5，—DMT基团连接纯化寡核苷酸，那么将其转变为TritylOnAuto结束状态。

6、选择结束方法通常是为系统的原始状态。

7、将你所希望的保存名字输入到每个柱监视器的Username下。

8、每一个收集瓶相应的DNA序列标记用代码代替。

9、将每一个柱设置的详细资料打印出来。

10、对打印出来的资料进行检查，判断是否正确。

11、为了确保合成仪上合成柱处于正确的位置，运行StartColumn步骤对每一个柱的位置进行检查。

12、对是否充满连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)进行检查。

13、保证试管充分清洁干净，保证DMT废液管路通向分部收集器。

14、将循环启动，运行开始程序对试剂管路进行清洗，将原来的试剂除去。

日常维护

1．流路节流阀

应该1个月清洗1次节流阀，以避免阻塞，清洗时，先在水中煮沸15min，然后再在甲醇中超声波清洗。

2．储液瓶

需要保持氩气压力以及管路清洁。瓶子在亚磷酰胺及储液瓶位置上放置。

3．瓶塞“O”形环

至少对“O”形环一月检查一次，1年更换1次。比较仪器上的“O”形环与新的备用“O”形环，若有白色沉淀出现在“O”形环上，用棉花蘸取乙腈进行清洗。