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大鼠AFP试剂盒实验操作步骤

本文由 上海华壹生物科技有限公司 整理汇编

2024-09-30 10:00 462阅读次数

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大鼠甲胎蛋白(AFP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒实验目的:本试剂盒仅供研究使用,用于测定大鼠血清,组织及相关液体样本中甲胎蛋白(AFP)的含量。实验原理:应用双抗体夹心法测定标本中大鼠甲胎蛋白(AFP)水平。用纯化的大鼠甲胎蛋白(AFP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入甲胎蛋白(AFP),再与HRP标记的甲胎蛋白(AFP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白(AFP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠甲胎蛋白(AFP)浓度。操作步骤:标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在**、第二孔中分别加标准品100μl,然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为12μg/L,8μg/L,4μg/L,2μg/L,1μg/L)。加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注:以上内容供参考,具体产品信息请来电或在线咨询。上海华壹生物科技有限公司ShanghaiHuaYiBio-technologyCo.,Ltd

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