限制微RNA转录因子活性的小分子筛选方法

本文由 上海恒远ELISA试剂盒供应商 整理汇编

2018-11-15 10:03 1079阅读次数

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• 限制微RNA转录因子活性的小分子筛选方法

  据《化学与工程新闻》（C&EN）周刊网站2014年2月17日报道，美国斯克利普斯研究所（TheScrippsResearchInstitute）和布法罗大学（TheUniversityatBuffalo）的研究人员合作，研究发现小分子可以YZ微小核糖核酸（微RNA）转录因子的活性(SmallMoleculesBlockActivityofMicroRNATranscriptionFactors),这项研究结果对于药物发现意义重大，因为阻碍或限制微RNA就意味着使癌细胞中的致死基因保持沉默而不会兴风作浪。要在成千上万的分子中找到可以限制微RNA活性的小分子可以说如同大海捞针，技术分析小分子(形状)和折叠RNA序列(黑色线条)之间的相互作用(见下图中的上方图示)，来识别可以限制与癌症相关的微RNA-96(如左下角图示)活性的苯并咪唑(如右下角图示)之类的药剂。NEEDLEINAHAYSTACKTechniqueanalyzesinteractions(top)betweensmallmolecules(shapes)andfoldedRNAsequences(blacklines)toidentifyagentssuchasabenzimidazole(bottomright)thatblockscancer-associatedmiRNA-96(bottomleft).研究人员开发了一种可以确定具有限制微小核糖核酸（miRNAs）功能的小分子的计算方法，该方法对于癌症和其他疾病的目标细胞而言是非常重要的。研究结果于2014年2月9日在《天然化学生物学》(NatureChemicalBiology)杂志网站发表SaiPradeepVelagapudi,StevenMGallo，MatthewDDisney.Sequence-baseddesignofbioactivesmallmoleculesthattargetprecursormicroRNAs.NatureChemicalBiology;Publishedonline09February2014;DOI:10.1038/nchembio.1452。这类可以限制微RNA活性的药剂之一，具有一种选择性的活性,表明基于此方法筛选的药物可能比传统癌症化疗药物的副作用更少。miRNAs是三维折叠的蛋白质未编码的RNA类小分子，而且可调节基因转录。在各种疾病如癌症中则出现过表达，在免疫反应中起到调节关键步骤的作用。诺贝尔奖得主、分子生物学家和生物化学家、美国麻省理工学院的菲利普A夏普（PhillipA.Sharp）教授对此研究成果评议认为，除了抗生素将细菌核糖体中的RNA作为目标之外，几乎没有开发出具有调节RNA功能作用的小分子,特别是在此之前miRNAs还没有可行的药物靶点。但是，这种新技术的能力就是来确定可以限制miRNA活性，“提供一组新药物”的小分子，来弥补以往之空缺。美国佛罗里达斯克里普斯研究所的马修D迪斯尼(MatthewD.Disney)和开发这种新方法的同事们，用其已经确定了20多种可以与miRNAs相应位点相互作用的小分子。其**的候选药物就是一种苯并咪唑（benzimidazole）化合物，会使miRNA-96的功能失去活力,而miRNA-96就是一种与癌症有关的miRNA。其活性类似于以前开发的miRNA-96-inhibitingantagomirs,这些物质都是一些通过特殊序列结合的，可以限制miRNA活性的寡核苷酸类物质（oligo-nucleotides）。但antagomirs不容易进入细胞,在体内迅速降解,而小分子如苯并咪唑类（benzimidazoles）类物质可以透过细胞,且往往持续时间更长。miRNAantagomir是经过特殊化学修饰的miRNA拮抗剂，通过与体内的成熟miRNA强竞争性结合，阻止miRNA与其靶基因mRNA的互补配对，YZmiRNA发挥作用。与普通YZ剂相比，miRNAantagomir在动物体内外具有更高的稳定性和YZ效果，且能克服体内细胞膜、组织等障碍富集于靶细胞。antagomir在细胞实验中不需要转染试剂，从而避免了转染试剂包装过程的复杂步骤及其对实验的影响。在动物实验中可用全身或局部注射、吸入、喂药等方法进行给药，作用效果持续时间可长达数周。与antagomirs不同,苯并咪唑与miRNA-96前体中的折叠结构基元结合,并不是与其本身的序列结合。小分子限制或阻碍miRNA-96的正常功能，即在癌细胞内YZ诱导凋亡FOXO1蛋白，该蛋白可能是一种细胞增殖的负性调节因子,同时亦是一种细胞凋亡促进因子，苯并咪唑是通过细胞凋亡而引起肿瘤细胞死亡。但是它并不会对没有FOXO1蛋白的细胞产生影响,这意味着类似苯并咪唑的药物可能药物副作用Z小。为了找到抗miRNA的小分子,迪士尼及其合作者采用一个名为Inforna的计算技术从序列来预测miRNA的二级结构,然后使用一个小分子/RNA相互作用数据库，识别可透过细胞的化合物,这种方法虽然有确定小分子药物的能力，但是迪斯尼认为从miRNA序列来开发药物尚有“许多疑虑有待解决。”美国北卡罗莱纳大学（UniversityofNorthCarolina）的RNA折叠生物信息学家（RNA-foldingbioinformatician）AlainLaederach对此研究结果评议说，“这是一项在选择细胞调节器的核心类作为目标进行研究的突破性成果，这种类型的化学打开一个潜在ZL目标的全新世界。”[详细]

  2018-11-15 10:03

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• 微藻营养盐限制的检测方法

  微藻营养盐限制的检测方法[详细]

  2024-09-18 18:09

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• 构建分子信标检测解螺旋酶活性的高通量筛选体系

  构建分子信标检测解螺旋酶活性的高通量筛选体系[详细]

  2024-09-28 12:53

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• 转录因子1(AP-1)检测试剂盒

  转录因子1(AP-1)检测试剂盒[详细]

  2015-05-18 00:00

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• 猪转录因子AP-1 ELISA试剂盒

  猪转录因子AP-1 ELISA试剂盒[详细]

  2015-05-07 00:00

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• 大鼠心肌转录因子ELISA试剂盒

  大鼠心肌转录因子ELISA试剂盒ELISA试剂盒价格|厂家促销ELISA试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。大鼠心肌转录因子GATA4ELISA试剂盒由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。中文名称：ELISA试剂盒货号：YM-2614B规格：96T/48T保质期：6个月，所有试剂盒均提供Zxin批次。试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。ELISA试剂盒实验操作步骤包括：从包被，封闭，加样，洗涤，加显色底物，终止液加入，到读书操作，还有标准曲线制作等详尽的操作说明。用途：用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中大鼠心肌转录因子GATA4ELISA试剂盒的含量。ELISA试剂盒使用优点：ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白，包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。灵敏，准确和一致的性能用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证在半天内可完成的现成，方便的[详细]

  2018-09-14 10:00

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• 拮抗凋亡转录因子 AATF单抗

  应用拮抗凋亡转录因子AATF单抗实验：试验验证过适用于Westernblotting实验、免疫组化实验（Immunohistochemistry）、ELISA实验。AATF单抗说明书，请打电话询要。拮抗凋亡转录因子包装规格：0.1ml、0.2mlAnti-AATF：鼠源单抗、兔源多抗重要提示：拮抗凋亡转录因子AATF单抗避免重复冻融，专为科研实验使用。欢迎打电话咨询详情！小鼠白介素3(IL-3)elisa试剂盒(VD2）Elisa试剂盒,植物维生素D2ELISA试剂盒,植物elisa,elisa试剂盒人血栓调节蛋白(TM)elisa试剂盒人肌细胞生成素(MYOG)elisa试剂盒(HELIX-Ⅱ)Elisa试剂盒,人Ⅱ型胶原螺旋肽Elisa试剂盒,人elisa,elisa试剂盒(FⅡ）Elisa试剂盒,大鼠凝血因子ⅡELISA试剂盒,大鼠elisa,elisa试剂盒人补体3裂解产物(C3SP)elisa试剂盒(VE）Elisa试剂盒,小鼠维生素EELISA试剂盒,小鼠elisa,elisa试剂盒小鼠甲基化酶(Methylase)elisa试剂盒人胸苷酸合成酶(TS)elisa试剂盒(ICAM-3/CD50）Elisa试剂盒,大鼠细胞间粘附分子3ELISA试剂盒,大鼠elisa,elisa试剂盒(PG)Elisa试剂盒,人蛋白聚糖Elisa试剂盒,人elisa,elisa试剂盒人补体片断3a(C3a)elisa试剂盒[详细]

  2018-11-05 10:00

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• 流动测试中的Z小剪切速率限制

  流动测试中的Z小剪切速率限制[详细]

  2024-09-27 23:54

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• 高通量RNA干扰技术筛选DNA损伤

  本文我们列举了如何通过对磷酸化的组蛋白H2AX和DNA进行免疫荧光双色分析方法来检测DNA损伤。组蛋白H2AX在丝氨酸139位点的磷酸化被认为是药物或辐射造成的DNA损伤的敏感标记。文中也阐明了我们利用RNAi对双色标定DNA损伤分析是一个敏感和快速的自动化过程，而且这种方法被证明可以有效发现新的目标。[详细]

  2021-02-19 13:46

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• 猪转录因子AP-1 ELISA检测试剂盒

  猪转录因子AP-1 ELISA检测试剂盒[详细]

  2015-05-07 00:00

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• 猪转录因子AP-1 ELISA检测试剂盒

  猪转录因子AP-1 ELISA检测试剂盒[详细]

  2015-04-22 00:00

  实验操作

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• 大鼠核转录因子（NF-）ELISA试剂盒

  大鼠核转录因子（NF-kB）ELISA试剂盒原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗大鼠NF-kB单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NF-kB与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠NF-kB，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，NF-kB浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中NF-kB浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：10ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成20ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）标本激活方法1.将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中,再加10ul血清或血浆标本。2.加20ul1NHCI,盖紧，上下混匀。2－8℃放置60±2分钟。3.加20ul1NNaOH,盖紧，上下混匀。4.即用，或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。（注意：不同的标本NF-kB的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）5.细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释（410ul的标本稀释液＋50ul样本＋20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH）。检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活）100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应NF-kB含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的NF-kB检测浓度小于15pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的大鼠NF-kB。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于8.9％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:00

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• 人PPARα转录因子 elisa试剂盒使用方法

  本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T7ng/L-250ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中PPARα转录因子含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人PPARα转录因子水平。用纯化的人PPARα转录因子抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入PPARα转录因子，再与HRP标记的PPARα转录因子抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的PPARα转录因子呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人PPARα转录因子浓度。[详细]

  2018-12-30 10:00

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• 生物小分子分离体积排阻色谱

  生物小分子分离体积排阻色谱[详细]

  2024-09-15 22:18

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• 人核转录因子（NF-kB）试剂盒产品供应

  人核转录因子（NF-kB）试剂盒产品供应[详细]

  2015-04-23 00:00

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• 大鼠核转录因子p65（NF-p65）ELISA试剂盒

  大鼠核转录因子p65（NF-kBp65）ELISA试剂盒原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗大鼠NF-kBp65单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NF-kBp65与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠NF-kBp65，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，NF-kBp65浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中NF-kBp65浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：20ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成20ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）标本激活方法1.将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中,再加10ul血清或血浆标本。2.加20ul1NHCI,盖紧，上下混匀。2－8℃放置60±2分钟。3.加20ul1NNaOH,盖紧，上下混匀。4.即用，或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。（注意：不同的标本NF-kBp65的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）5.细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释（410ul的标本稀释液＋50ul样本＋20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH）。检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活）100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应NF-kBp65含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的NF-kBp65检测浓度小于15pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的大鼠NF-kBp65。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于8.9％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:00

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• 人核转录因子（NF-）ELISA试剂盒说明书

  电话：021-6533363955229872网址：http://www.westang.com人核转录因子（NF-kB）ELISA试剂盒原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人NF-kB单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NF-kB与单抗结合，加入生物素化的抗人NF-kB，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，NF-kB浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中NF-kB浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：10ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成20ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）标本激活方法1.将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中,再加10ul血清或血浆标本。2.加20ul1NHCI,盖紧，上下混匀。2－8℃放置60±2分钟。3.加20ul1NNaOH,盖紧，上下混匀。4.即用，或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。（注意：不同的标本NF-kB的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）5.细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释（410ul的标本稀释液＋50ul样本＋20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH）。检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活）100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应NF-kB含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的NF-kB检测浓度小于15pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人NF-kB。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于8.9％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:01

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• 人转录因子TBX3（TBX3）ELISA试剂盒说明书

  电话：021-6533363955229872网址：http://www.westang.com人转录因子TBX3（TBX3）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TBX3单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TBX3与单抗结合，加入生物素化的抗人TBX3，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，TBX3浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中TBX3浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：40ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应TBX3含量。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的TBX3检测浓度小于30pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人TBX3。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:01

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• 人转录因子E2F1（E2F1）ELISA试剂盒说明书

  人转录因子E2F1（E2F1）ELISA试剂盒原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人E2F1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的E2F1与单抗结合，加入生物素化的抗人E2F1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液，在450nm处测OD值，E2F1浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中E2F1浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：2ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，配成4000pg/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液200ul。在**管中加入4000pg/ml的标准品溶液200ul混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出200ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）标本激活方法1.将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中,再加10ul血清或血浆标本。2.加20ul1NHCI,盖紧，上下混匀。2－8℃放置60±2分钟。3.加20ul1NNaOH,盖紧，上下混匀。4.即用，或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。（注意：不同的标本E2F1的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）5.细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释（410ul的标本稀释液＋50ul样本＋20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH）。检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活）100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应E2F1含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的E2F1检测浓度小于15pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人E2F1。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于8.9％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

  2018-09-13 10:01

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• 人转录因子AP-1（AP-1）ELISA试剂盒说明书

  人转录因子AP-1（AP-1）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人AP-1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的AP-1与单抗结合，加入生物素化的抗人AP-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，Z后加终止液，在450nm处测OD值，AP-1浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中AP-1浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：40ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗体工作液（BiotinylatedAntibody）12ml终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3.每孔中加入**抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。4.洗板：同前。5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。8.每孔加入100ul终止液混匀。9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应AP-1含量。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的AP-1检测浓度小于30pg/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人AP-1。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！[详细]

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