细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂盒

本文由 上海科学仪器有限公司 整理汇编

2018-11-18 10:00 701阅读次数

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• 细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂盒

  主要用途细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出活性完整而高度纯化的溶酶体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的溶酶体的制备。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度俱佳。技术背景溶酶体（lysosome）是一种普遍存在于真核细胞中的细胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等，分解各种细胞残渣和废弃物质，包括过多的或破损的其它细胞器、食物颗粒、吞噬的细菌和病毒等。其大小为0.5至1.5微米，球圆形，溶酶体内pH为5.0左右。溶酶体功能异常会引起溶酶体贮积症（1ysosomalstoragedisorders；LSDs），例如家族性白痴病（Tay-sachsdisease）和庞贝氏症（Pompe’sdisease）。溶酶体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离溶酶体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得溶酶体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的溶酶体。[详细]

  2018-11-18 10:00

  产品样册

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• 细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-19 00:00

  安装说明

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• 细胞/组织溶酶体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞/组织溶酶体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-02-04 00:00

  其它

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• 粪便DNA高质纯化试剂盒

  粪便DNA高质纯化试剂盒产品说明书主要用途粪便DNA高质纯化试剂是一种旨在经过标准分离法以后，由粪便（人体、动物等）中分离获得的DNA，进行二度亲和纯化，Zda限度地去除复杂又难以去除的蛋白、金属成分、杂质等非核酸类物质的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其应用于即时PCR、RLPF分析、测序、杂交、遗传鉴定、突变分析、性别鉴定、司法鉴定等。产品即到即用，性能稳定，操作简单，纯度出色，重复性好，堪称国际上同类产品**。技术背景粪便中含有许多污染成分，降解DNA和YZPCR反应。针对标准处理无法有效地去除顽固干扰因子的情况下，运用特殊亲和技术，达到高度纯化的效果。产品内容缓冲液（ReagentA）2毫升亲和液（ReagentJ）2毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于DNA纯化操作的容器微型台式离心机（例如EPPENDORF5415）：用于沉淀反应物恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤1．准备好从1克粪便样品分离的DNA产物（100微克DNA总量）2．移入到1.5毫升离心管3．加入适量的缓冲液（ReagentA）到总容量为100微升4．加入100微升亲和液（ReagentB）（注意：使用前，先摇匀沉淀的亲和液（ReagentB））5．用手充分混匀6．放进56℃恒温水槽孵育30分钟，期间用手混匀一次7．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF5415）8．小心移出180微升上清液到新的1.5毫升离心管9．移出适量DNA溶液进行后续PCR反应或保存在－20℃冰箱里注意事项1．本产品为20次（1克粪便样品的DNA产物）操作或50次（200毫克粪便样品的DNA产物）操作2．操作时，须戴手套3．根据用户样品量大小，相应调整试剂用量4．亲和液（ReagentB）使用前，须摇匀5．建议使用粪便DNA分离试剂盒（HL20011.1）作为标准分离法操作6．本公司提供系列粪便核酸纯化试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定纯度优异[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 粪便DNA高质纯化试剂盒产品说明书

  粪便DNA高质纯化试剂盒产品说明书主要用途粪便DNA高质纯化试剂是一种旨在经过标准分离法以后，由粪便（人体、动物等）中分离获得的DNA，进行二度亲和纯化，Zda限度地去除复杂又难以去除的蛋白、金属成分、杂质等非核酸类物质的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其应用于即时PCR、RLPF分析、测序、杂交、遗传鉴定、突变分析、性别鉴定、司法鉴定等。产品即到即用，性能稳定，操作简单，纯度出色，重复性好，堪称国际上同类产品**。技术背景粪便中含有许多污染成分，降解DNA和YZPCR反应。针对标准处理无法有效地去除顽固干扰因子的情况下，运用特殊亲和技术，达到高度纯化的效果。产品内容缓冲液（ReagentA）2毫升亲和液（ReagentJ）2毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于DNA纯化操作的容器微型台式离心机（例如EPPENDORF5415）：用于沉淀反应物恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤1．准备好从1克粪便样品分离的DNA产物（100微克DNA总量）2．移入到1.5毫升离心管3．加入适量的缓冲液（ReagentA）到总容量为100微升4．加入100微升亲和液（ReagentB）（注意：使用前，先摇匀沉淀的亲和液（ReagentB））5．用手充分混匀6．放进56℃恒温水槽孵育30分钟，期间用手混匀一次7．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF5415）8．小心移出180微升上清液到新的1.5毫升离心管9．移出适量DNA溶液进行后续PCR反应或保存在－20℃冰箱里注意事项1．本产品为20次（1克粪便样品的DNA产物）操作或50次（200毫克粪便样品的DNA产物）操作2．操作时，须戴手套3．根据用户样品量大小，相应调整试剂用量4．亲和液（ReagentB）使用前，须摇匀5．建议使用粪便DNA分离试剂盒（HL20011.1）作为标准分离法操作6．本公司提供系列粪便核酸纯化试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定纯度优异[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书

  细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书[详细]

  2015-08-25 00:00

  课件

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• 细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书

  细胞/组织高尔基体粗提分离试剂盒产品说明书[详细]

  2014-12-31 00:00

  应用文章

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• 纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒

  主要用途纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在线粒体氧化条件下，产生荧光，来定量检测线粒体内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）次氯酸（hypochlorousacid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,acetylester；CM－H2DCFDA）是取代二氯二氢荧光素二乙酯（2,7-dichlorodihydrofluorescindiacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。产品内容缓冲液（ReagentA）毫升补充液（ReagentB）毫升染色液（ReagentC）微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，染色液（ReagentC），严格避免光照；有效保证12月用户自备培养箱：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂放进冰槽里融化，避免光照；同时从－80℃冰箱里取出待测的线粒体，[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 活体细胞溶酶体形态/活性荧光染色试剂盒

  主要用途活体细胞溶酶体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在溶酶体，并呈现红色，用于分析和观察溶酶体形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种溶酶体（动物、人体、昆虫等）的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定，滞留持久。技术背景溶酶体（lysosome）是一种普遍存在于真核细胞中的细胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等，分解各种细胞残渣和废弃物质，包括过多的或破损的其它细胞器、食物颗粒、吞噬的细菌和病毒等。其大小为0.5至1.5微米，球圆形，溶酶体内pH为5.0左右。溶酶体功能异常会引起溶酶体贮积症（1ysosomalstoragedisorders；LSDs），例如家族性白痴病（Tay-sachsdisease）和庞贝氏症（Pompe’sdisease）。溶酶体荧光探针LysoTrackerRED，是一种向酸性（acidotropic）探针，含有荧光基团在弱碱上，高度选择性地染色酸性细胞器溶酶体。探针自由通过细胞膜，选择性地聚集在溶酶体内。它可以对活细胞进行直接染色，在590nm波长可以清晰看到被染成红色的溶酶体。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒

  呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒[详细]

  2015-04-29 00:00

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• 蛋白质的分离纯化

  蛋白质的分离纯化[详细]

  2013-03-31 00:00

  专利

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• 活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）-完整性吖啶橙荧光检测试剂盒

  活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒产品说明书主要用途活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂是一种旨在通过吖啶橙吸收和细胞内再分布检测技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，即存在于或由溶酶体释放到细胞浆的荧光染料的不同荧光强度变化，来分析和观察溶酶体膜通透性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞溶酶体（动物、人体、昆虫等）膜通透性的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。技术背景溶酶体（lysosome）是一种动态性的、多态性的、含有水解酶的细胞器，具有接受和降解来自于分泌性、内吞性（endocytic）、自噬性（autophagic）、吞噬性（phagocytic）膜运转通路中的大分子。其功能是膜依赖性，具有和防御作用。溶酶体膜是溶酶体内基质和胞浆之间的生理屏障，为整合性糖蛋白，防止细胞自我降解。一旦溶酶体膜去稳定（destabilization），例如碱性化或内容物移位（translocation），将导致质子和水解酶外漏，而造成细胞器功能异常，进而产生细胞坏死、凋亡，以及病理症状，例如朊病毒脑病（prionencephalopathies）、阿茨罕默病、心肌缺血、脊髓灰质炎病毒感染、补体激活型肺损伤（complementactivation-producedlunginjury）、急性组织损伤等疾病。其中膜通透性增加，是溶酶体膜去稳定性或去完整性的标志之一，溶酶体内容物大量释放到胞浆中，直接影响细胞的存活。吖啶橙（acridineorange；AO）是一种亲溶酶体（lysomotropic）异染性（metachromatic）的荧光染料，在完整的溶酶体内，为质子化（protonated）寡聚体（oligomeric）形式，呈现红色荧光（激发波长555nm，散发波长617nm），而在胞浆内，为单体去质子化形式，呈现绿色荧光（激发波长490nm，散发波长528nm）。吖啶橙进入溶酶体后重新分布，即吸收和细胞内再分布（uptakeandredistribution），用于分析溶酶体膜通透性状况。产品内容清理液（ReagentA）毫升染色液（ReagentB）微升产品说明书1份保存方式保存染色液（ReagentB）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器微型台式离心机：用于沉淀细胞培养箱：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于细胞荧光定量分析细胞流式仪：用于细胞荧光分析实验步骤贴壁细胞染色准备1个细胞培养24孔板的待测细胞（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项8）小心抽去细胞培养液小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的清理液（ReagentA）到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面小心抽去清理液小心沿着孔壁加入xx微升染色液（ReagentB）到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照小心抽去染色液（ReagentB）小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的清理液（ReagentA）到细胞培养孔小心抽去清理液重复实验步骤8和9一次小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的清理液（ReagentA）到细胞培养孔选择下列方式之一进行操作：（A）使用倒置荧光显微镜观察（定性检测）：激发波长490nm，散发波长528nm――绿色荧光增强，表明膜通透性（LMP）增强激发波长555nm，散发波长617nm――红色荧光减弱，表明膜通透性（LMP）增强使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：激发波长490nm，散发波长528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增强激发波长555nm，散发波长617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增强悬浮细胞或脱离细胞染色将悬浮细胞或脱离细胞（1X106细胞）移入到1.5毫升离心管放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液加入xx微升37℃预热的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液加入xx微升37℃预热的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群加入xx微升含有染色液（ReagentB），充分混匀放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液加入xx微升37℃预热的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液重复实验步骤12至14一次加入xx微升37℃预热的清理液（ReagentA），混匀细胞颗粒群选择下列方式之一进行操作：进行细胞流式仪分析：FL1（激发波长488nm，散发波长528nm），或FL3（激发波长555nm，散发波长617nm）观察10000个细胞以上――FL1：波峰右移，表明膜通透性（LMP）增强FL3：波峰左移，表明膜通透性（LMP）增强或使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片激发波长490nm，散发波长528nm――绿色荧光增强，表明膜通透性（LMP）增强激发波长555nm，散发波长617nm――红色荧光减弱，表明膜通透性（LMP）增强或使用荧光分光光度仪检测（定量检测）：1）移取500微升上述细胞悬液到1毫升比色杯2）加入xx微升清理液（ReagentA）3）上下倾倒混匀数次4）放进荧光分光光度仪：激发波长490nm，散发波长528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增强激发波长555nm，散发波长617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增强注意事项本产品为20次（0.5毫升体系/次）操作操作时，须戴手套操作时，避免污染母液建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析孵育时，必须避免光照本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：操作容器建议操作体系载玻片100微升载玻片培养皿1毫升35mm培养皿1毫升96孔培养板100微升48孔培养板200微升24孔培养板500微升12孔培养板1毫升6孔培养板2毫升25cm2细胞培养瓶3毫升可以使用绿色荧光中激发波长490nm±20，散发波长528±38；红色荧光中激发波长555±28，散发波长617±50用户可以持续读数5分钟，观察荧光读数的增强或减低，以表明荧光染料的移位变化本公司提供系列溶酶体分析试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定荧光清晰[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒

  主要用途活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂是一种旨在通过吖啶橙吸收和细胞内再分布检测技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，即存在于或由溶酶体释放到细胞浆的荧光染料的不同荧光强度变化，来分析和观察溶酶体膜通透性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞溶酶体（动物、人体、昆虫等）膜通透性的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。技术背景溶酶体（lysosome）是一种动态性的、多态性的、含有水解酶的细胞器，具有接受和降解来自于分泌性、内吞性（endocytic）、自噬性（autophagic）、吞噬性（phagocytic）膜运转通路中的大分子。其功能是膜依赖性，具有和防御作用。溶酶体膜是溶酶体内基质和胞浆之间的生理屏障，为整合性糖蛋白，防止细胞自我降解。一旦溶酶体膜去稳定（destabilization），例如碱性化或内容物移位（translocation），将导致质子和水解酶外漏，而造成细胞器功能异常，进而产生细胞坏死、凋亡，以及病理症状，例如朊病毒脑病（prionencephalopathies）、阿茨罕默病、心肌缺血、脊髓灰质炎病毒感染、补体激活型肺损伤（complementactivation-producedlunginjury）、急性组织损伤等疾病。其中膜通透性增加，是溶酶体膜去稳定性或去完整性的标志之一，溶酶体内容物大量释放到胞浆中，直接影响细胞的存活。吖啶橙（acridineorange；AO）是一种亲溶酶体（lysomotropic）异染性（metachromatic）的荧光染料，在完整的溶酶体内，为质子化（protonated）寡聚体（oligomeric）形式，呈现红色荧光（激发波长555nm，散发波长617nm），而在胞浆内，为单体去质子化形式，呈现绿色荧光（激发波长490nm，散发波长528nm）。吖啶橙进入溶酶体后重新分布，即吸收和细胞内再分布（uptakeandredistribution），用于分析溶酶体膜通透性状况。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 组织DNA的提取和纯化

  组织DNA的提取和纯化[详细]

  2015-10-15 00:00

  标准

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• 糖的分离纯化解决方案

  糖的分离纯化解决方案[详细]

  2024-09-14 16:37

  课件

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• PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒

  PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒[详细]

  2015-09-11 00:00

  标准

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• PCR 纯化试剂盒/DNA 纯化试剂盒

  PCR 纯化试剂盒/DNA 纯化试剂盒[详细]

  2014-12-11 00:00

  期刊论文

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• 活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒产品说明书

  活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒产品说明书[详细]

  2015-04-23 00:00

  产品样册

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• 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书

  动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒产品说明书主要用途动物细胞/组织活性线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的活性线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高，活性保证，可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品**。技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的Z常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：**，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升净化液（ReagentC）毫升强化液（ReagentD）毫升保存液（ReagentE）毫升活性液（ReagentF）微升产品说明书1份保存方式保存净化液（ReagentC）和活性液（ReagentF）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液（12028）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管：用于保存线粒体4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞实验步骤一、动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和4毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的xx毫升裂解工作液7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项8）9．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管，10．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g11．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞12．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g13．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物14．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）15．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g16．（选择步骤）小心抽去上清液17．加xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀18．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里二、动物软组织线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前**使动物空腹12至24小时）2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（ReagentA）清洗1次4．移入一个液氮冻存管5．即刻放进液氮罐过夜6．次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）碾碎组织（注意：切莫使组织冻融）7．放进一个15毫升锥形离心管8．加入预冷的xx毫升裂解工作液9．涡旋震荡5秒，充分混匀10．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒11．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）12．涡旋震荡5秒，充分混匀13．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）14．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀15．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g16．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞17．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g18．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物19．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）20．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g21．（选择步骤）小心抽去上清液22．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀23．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里三、动物细胞线粒体分离（细胞匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，3．小心抽去清洗液4．重复实验步骤2至3一次5．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6．放进37℃培养箱孵育3分种7．手击震动培养瓶，使细胞脱落8．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液9．全部移入到一个50毫升锥形离心管10．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g11．小心抽去上清液12．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA），混匀细胞13．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g14．小心抽去上清液15．加入预冷的xx毫升裂解工作液16．涡旋震荡5秒，充分混匀细胞颗粒群17．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化细胞（约80下）（注意：参见注意事项8）18．将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g20．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞21．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g22．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物23．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）24．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g25．（选择步骤）小心抽去上清液26．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀27．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里四、动物细胞线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的活性液（ReagentF）冻融，然后移出xx微升活性液（ReagentF）、xx毫升净化液（ReagentC）和xx毫升的裂解液（ReagentB）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。1．准备5至10瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5X107），直至细胞生长铺满整个培养表面2．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐溶液或PBS溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面28．小心抽去清洗液3．重复实验步骤2至3一次4．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面5．放进37℃培养箱孵育3分种6．手击震动培养瓶，使细胞脱落7．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液8．全部移入到一个50毫升锥形离心管9．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g10．小心抽去上清液11．加入xx毫升预冷的清理液（ReagentA）12．放进台式离心机离心10分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入预冷的xx毫升裂解工作液15．涡旋震荡5秒，充分混匀16．在冰槽里孵育2分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒17．加入预冷的xx微升强化液（ReagentD）18．涡旋震荡5秒，充分混匀19．在冰槽里孵育5分钟，其中每间隔一分钟涡旋震荡5秒（注意：参见注意事项9）20．加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE），用手混匀21．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g22．小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管此步骤去除细胞核和未溶解的细胞23．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒此步骤获得线粒体沉淀物25．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（ReagentE）26．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g27．（选择步骤）小心抽去上清液28．加入xx毫升保存液（ReagentE），充分混匀29．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里注意事项1．本产品为10次（1克动物组织或5X107细胞）或50次（200毫克动物组织或1X107细胞）操作2．实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整：例如200毫克动物组织：试剂用量是标准用量的五分之一3．所有操作均须在4℃或以下状态进行4．操作时，须戴手套5．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（ReagentB）和保存液（ReagentE）6．建议使用足够的样品量7．建议严格控制操作时间8．通常匀化次数为80下达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数9．通常孵育5分钟达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数10．对于难以裂解的细胞，例如HeLa细胞，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理11．通常5X107细胞或1克动物组织的线粒体含量为50微克以上线粒体蛋白12．如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解13．本产品所获得的线粒体纯度和产量Z为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g，可以提高粗提的线粒体纯化程度，但线粒体产量相应减少14．如果需要获得99％以上纯度的线粒体，使用动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒－10006.315．线粒体正常活性测定方法是：CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等16．线粒体内外膜完整测定方法是：CYTOCHROMECOXIDASE活性和荧光JC染色17．本公司提供线粒体套餐：ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等18．本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整3．本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性4．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 荷叶提取物的分离和纯化

  荷叶提取物的分离和纯化[详细]

  2007-01-18 00:00

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