干性年龄相关性黄斑变性（AMD）预计2040年影响全球近3亿人，迄今尚无有效的治疗方案，目前多项将人多能干细胞来源的视网膜色素上皮细胞（hPSC-RPE）作为细胞替代疗法的临床试验正在进行中，需每年大于10个细胞的生产能力。
本研究开发了基于Cytodex 1（C1）和Cytodex 3（C3）微载体的hPSC-RPE培养体系，证明细胞可贴附于基质胶、玻连蛋白或胶原蛋白包被的微载体。
细胞成熟后具有特征性上皮细胞形态和色素沉着，表达RPE标志性基因，并能分泌PEDF和VEGF、表现出对光感受器外段的吞噬作用。未分化hESCs可在微载体上定向分化为RPE，微载体技术为大规模生产治疗性RPE细胞提供了高效方案。
一、研究背景与目标
疾病负担：干性AMD占AMD患者90%，到2040年全球预计2.88亿患者，目前无获批疗法；
技术瓶颈：hPSC-RPE细胞疗法需每年生产>10?个细胞，传统2D培养（如T-75 flask）效率低、成本高，微载体技术（如Cytodex系列）可通过高密度悬浮培养解决规模化问题。
二、微载体培养体系构建
三、关键结果
3.1
细胞黏附与成熟表征
形态与色素沉着：hPSC-RPE在3种微载体均形成多边形上皮样单层，30天可见明显色素颗粒（图1b）。
基因表达：
RPE标志物
BEST1、RPE65、TYRP1、PMEL17表达显著，其中C1Vn和C3Clg的BEST1表达高于2D培养（p=0.0309和0.0012）；
成熟相关基因
RLBP1表达在所有微载体中均显著高于2D（p<0.0001）。
图1
3.2
功能验证
分泌因子：
C1Vn优势
30天时VEGF分泌量显著高于C1Mg和C3Clg（p<0.001）。
吞噬功能：mcRPE可吞噬荧光标记的光感受器外段（POS），平均5.9-7.2个POS/细胞，阻断αvβ5整合素后吞噬率下降50%（p<0.05）。
图2
3.3
hESCs定向分化为RPE
分化效率：H9 hESCs在C1Mg微载体经14天诱导，OCT4表达下降90%，早期眼区标志物LHX2/RAX先升后降，RPE标志物TYR/TYRP1/PMEL17显著上调（p<0.001）；
可行性：分化过程中细胞存活率>85%，证明微载体可整合“分化+扩增”一体化流程。
四、规模化生产潜力
表面积对比：
成本优势：微载体减少空间占用和操作成本，适配自动化封闭生产线，符合cGMP标准。
五、结论
微载体技术可支持hPSC-RPE的高密度培养、功能成熟及定向分化，为AMD细胞疗法的规模化生产提供了关键技术突破，同时为分泌型生物药生产奠定基础。
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