重大突破：“植物蛋白质组学”样品制备新技术来了！

该样品制备技术的核心原理其实很简单：

• 甲醇固定：用甲醇将植物组织（如叶片、花粉）固定到E3或E4 Tips/Filter中的膜上，同时细胞膜变得通透，细胞内蛋白质凝固，这一步使得后续加入的还原、烷基化、酶解试剂进入细胞内部；

• 滤膜上处理：在E3或E4 Tips/Filter中的滤膜上完成蛋白质的还原、烷基化和酶解；

• 质谱检测：酶解后的肽段通过洗脱、脱盐后，即可进行LC-MS/MS分析，无需额外的复杂步骤。
  

整个流程实现了 “单容器操作”，不仅省去了机械破碎细胞的过程，还将样本处理时间从传统的数小时缩短到24小时内（其中大部分是酶解的等待时间，实际操作时间仅需1-2小时）。

为了验证 “细胞内蛋白质组学” 样本处理技术的优势，研究团队以拟南芥、本氏烟草、玉米、高粱等种类植物为研究对象，将其与传统的SDS裂解、TFA裂解方法行了全面对比。结果令人惊喜，新技术的表现远超预期！

蛋白质鉴定深度更高、定量准确性和重复性更好

在叶片样本分析中，OFIC样本处理技术通过单次LC-MS/MS分析，就能从拟南芥叶片中鉴定出约9600种蛋白质，玉米叶片中鉴定出8600种蛋白质，本氏烟草叶片中更是鉴定出12000种蛋白质——这样的分析结果远超传统SDS裂解方法（通常单次分析仅能鉴定出5000-7000种蛋白质）。

分析结果显示，OFIC技术的蛋白质组定量分析变异系数（CV）仅为15%左右，样本间的皮尔逊相关系数接近0.97，远优于传统SDS裂解方法（CV约20%，相关系数0.92）和TFA裂解方法（CV约30%，相关系数0.85）。这意味着新技术能更精准地捕捉样本间的蛋白质表达差异，为后续的差异表达分析提供更可靠的数据基础。

对于更难处理的花粉样本，新方法同样表现出色：仅需1/10朵本氏烟草花的花粉，或2朵拟南芥花的花粉，就能分别鉴定出8500种和6400种蛋白质，而传统方法往往需要大量花粉才能完成分析，且蛋白质鉴定数量不足5000种。

传统方法处理植物叶片通常需要至少100mg的新鲜组织，而OFIC新方法仅需1/4片叶片（约25mg）就能完成分析；对于花粉这类微量样本，新方法的优势更为明显——仅需微量花粉就能满足实验需求，解决了珍稀样本样本量少难以分析的困难。

“细胞内蛋白质组学”样本处理技术的出现，不仅解决了传统方法的诸多痛点，还大大降低了蛋白质组学样本处理的技术门槛。研究团队表示，这种方法还可应用于其他植物组织或其他类型蛋白质组学样本。