应用｜SHIMSEN Ankylo SEC色谱柱分析双抗样品的大小异质性

来源：岛津（上海）实验器材有限公司      分类：商机 2022-06-05 19:14:39 942阅读次数

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SHIMSEN Ankylo SEC色谱柱

分析双抗样品的大小异质性

背景介绍

双特异性抗体（以下简称双抗）是同时能够结合两个不同表位或者抗原的抗体，从而阻断或激活双靶点信号通路，介导免疫细胞对肿瘤细胞更好的杀伤，因此可能会获得比单一抗体更好的临床结果，双抗研发也备受关注。在双抗产品研发生产过程中，需要对其大小异质性行分析，反映双抗连接情况，保障产品质量，非片段化设计的双抗分子量较大，故通常采用尺寸排阻色谱法（SEC）进行其大小异质性分析。

1 实验条件

色谱柱：

• SHIMEN Ankylo SEC-300,

  300mmx4.6mm I．D．，3μm

  （P／N 380-01215-11）

• 流动相：

  A相：50mM 磷酸盐缓冲液＋300 mM NaCl（pH6.8）

  B相：乙腈

• 流速：0.21 mL／min

• 柱温：30℃

• 进样量：5μL

• 洗脱方式：等度洗脱，10％B相

• 流通池：半微量流通池

2 实验结果

连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表所示。标准溶液的保留时间和峰面积的相对标准偏差（RSD％）分别小于0.2％和2％，表明精密度良好。

、

3 结论

本方法使用SHIMEN Ankylo SEC-300,300mmx4.6mm I．D．，3μm色谱柱，最 佳流速为0.21mL／min，因此该方法采用了半微量流通池，避免在低流速下使用标准流通池而产生峰扩散导致分离度不佳的现象。双抗样品共出现4个主要色谱峰，该双抗样品为单抗Fc端融合型，根据尺寸排阻色谱出峰顺序，4个主要色谱峰分为双抗，单抗（未能融合），ScFv（单链抗体）以及碎片。各个色谱峰峰形良好，且分离度都大于1.5，表明分离良好。

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END

标签：双特异性抗体 SHIMSEN Ankylo SEC色谱柱

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