【色谱学堂】采用Quasar C18色谱柱进行半合成抗生素阿奇霉素的HPLC分析

阿奇霉素Z早发现于 1980 年，是一种衍生自红霉素的半合成大环内酯类抗生素。¹这种药主要用于ZL各种细菌感染，包括呼吸道感染、急性细菌性鼻窦炎、皮肤感染、莱姆病和一些性传播感染。²阿奇霉素的作用方式是通过与细菌核糖体的 50S 亚基结合来YZ细菌蛋白质合成，从而YZ信使核糖核酸（mRNA）的转化。³

关于分析阿奇霉素的美国药典（USP）专论指出使用高 pH 流动相（pH 11），需要用到专门的价格昂贵的色谱柱。此方法还采用安培电化学检测，这在许多实验室中通常无法实现。带 UV 或 PDA 检测器的 HPLC 是一种不错的替代方案，大多数实验室都可以实现。¹本应用简报介绍了 Quasar™ C18 色谱柱在阿奇霉素分析中的应用。

实验条件

方法参数

所有GX液相色谱法参数参见表 1。许多文献方法提出采用 C18 色谱柱（250×4.6mm，5μm 或 150×4.6mm，5μm）来分析阿奇霉素。本应用简报详细介绍了采用Quasar C18 150×4.6 mm，5μm 色谱柱，缩短长度的同时减少分析时间。

表1. GX液相色谱法参数。

溶剂和样品

所用的所有溶剂和试剂均为 HPLC 级。使用磷酸二氢钾（KH₂PO₄）和磷酸氢二钾（K₂HPO₄）制备磷酸盐缓冲液（pH 7.5，0.03M）。

在 10mL 容量瓶中取 60/40 的甲醇/缓冲溶液，溶解一定量的阿奇霉素盐酸盐（相对分子质量 =785.02 g/mol），相当于 10mg 阿奇霉素（相对分子质量 =748.98 g/mol），制得 1 mg/mL  阿奇霉素标准溶液。在分析之前，用 0.22 μm 尼龙滤膜（P/N：02542881）将标准溶液过滤。

结果和讨论

采用 Quasar C18（150×4.6 mm，5μm）色谱柱进行的阿奇霉素（图 1）分析得到的保留时间不足 9 分钟（图 2）。Quasar C18 色谱柱非常适用于阿奇霉素等小分子物质分析，通过配体/分析物相互作用实现**保留性能。同时，由于 Quasar 固定相的硅基具有超高纯度且残留硅醇活性较低，从而得到了极 佳的峰形（表 2）。在 5% 峰高处测得不对称因子。

图 1. 阿奇霉素的化学结构。

图 2. 采用 Quasar C18 色谱柱（150×4.6 mm，5μm）对阿奇霉素进行 HPLC 分析。

表2.结果汇总

在5%峰高处测得不对称因子。

进样的稳定性，特别是柱效和不对称因子如图 3 所示。结果显示，在此方法的高温和高 pH 情况下，50 次进样表现出极好的稳定性。

图 3. 在 50 次 pH 7.5 阿奇霉素标准溶液的进样过程中评估柱效和不对称因子。

结论

·在此方法的高温和高 pH 情况下，Quasar C18 HPLC 色谱柱可以稳定地分离半合成抗生素并表现出极好的稳定性。

·即使阿奇霉素含有某种极性官能团，但由于硅基具有超高纯度且残留硅醇活性较低，仍得到了极 佳的峰形。

·使用保留性能较差的 Quasar C8 色谱柱可以缩短运行时间。

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《采用Quasar C18色谱柱进行半合成抗生素阿奇霉素的HPLC分析应用简报》

参考文献

1. F. Al-Rimawi and M. Kharoaf, Analysis of Azithromycin and Its  Related Compounds by RP-HPLC with UV Detection, Journal of  Chromatographic Science, 48, 2010, 86-90.

2. https://www.nhs.uk/medicines/azithromycin/. Date accessed:  May 2019.

3. 3. J. Retsema, A. Girard, W. Schelkly, M. Manousos, M.  Anderson, G. Bright, R. Borovoy, L. Brennan, and R. Mason,  Spectrum and Mode of Action of Azithromycin (CP-62,993),  a New 15-Membered-Ring Macrolide with Improved Potency  against Gram-Negative Organisms, Antimicrobial Agents and  Chemotherapy, 31, 1987, 1939-1947.