浅谈粮油食品中黄曲霉毒素的检测方法

随着社会经济的不断发展，人们生活水平的不断提高，人们对食品安全越发重视和关注，在日常生活当中加强食品检测已经成为当前质检管理部分的一个重要课题。黄曲霉毒素B1，是一种强烈的致癌物质，自20世纪代初在英国发现以来，全世界有不少食用霉变食品引起人类中毒的报道。流行病学调查发现肝癌发病率在地区上的分布与当地粮油食品受黄曲霉毒素污染程度有密切关系，在污染严重的地区，肝癌发病率较高。所以加强食品中黄曲霉毒素B1的检测，有利构建食品安全体系，造福万千群众。

1.黄曲霉毒素B t测定原理与步骤方法

在食品中黄曲霉毒素B1检测方法很多，有些样品如薯类及部分酱料、油类样品受样品杂质干扰的影响，因而使方法的灵敏度降低。目前通常采用双向展开法，可以提高了检测方法的灵敏度，如测定了一份薯类样品，按灵敏度由原法的25ppb提高到5 ppb，同时测定了含杂质较多的花生油、酱油及曲种等样品，情况亦是如此。而原法灵敏度为5 ppb的样品（如花生及部分花生油样品等）用双向展开法展开，其灵敏度亦可以进一步提高，有的可提高到1.25ppb。今将双向展开法的原理及操作步骤介绍如下：

2.原理

因无水乙 醚不能推动黄曲霉毒素B-（以下简称B），在用乙 醚将薄层板横展时，可以把干扰的杂质推到样品点的旁边，而不像用乙 醚纵展时，有时在样品的过道中留有部分杂质的底色。在乙 醚横展后再用丙酮：氯仿纵展，可以使样品在B1标准点相应处的杂质底色大量的减少。从而提高了原有方法的灵敏度。

试剂（补充的）： 无水乙 醚，分析纯，在无水乙 醚中加入少许无水硫酸钠贮存。

操作步骤： 主要补充双向展开法的操作步骤，其它参照B1测定法。

3.滴加方法

　　由于在具体测定条件下，用无水乙 醚展开后Bt仍有很少的移动（因无水乙 醚中含微量的水或醇以及空气中的湿度太大等均可以使B，移动），因此在滴加时必需同时滴加两块层析板。在一块5×20厘米的薄层板上距下端3厘米的基线上滴加以下两个点：第1个点离左边边距0.8～1厘米处滴加B。标准液Ⅲ（o.04微克／毫升）10微升；第2个点离第一个点的间隔距离约1.8--2.O厘米处滴加样液20微升。在另一块上的滴加样式完全与第一块相同，祗在第二个样品点上再滴加B1标准液Ⅲ 0.04（微克／毫升）10毫升。

4.展开方法

①横展

在展开槽内的长边放置玻璃支架一个，再加无水乙 醚10毫升。将薄层板靠B t标准点的长一边放在展开槽内展开（因B t标准点在下端，则展开时没有杂质拖到第2个点），尽量使薄层板的斜度要小些，浸泡薄层板的深度为0.1厘米左右，以避免Bt标准点泡入展开剂中，一直展开到展开剂前沿刚到板端为止，立即取 出挥干（在展开前一定先要将无水乙 醚及试验条件选好，尽量使B-无移动或少移动，最多不能移动到第2个点处）。

②纵展

将横展后挥干的薄层板靠近滴加点的短一边用丙酮：氯仿（8：92）展开至前沿距原点12厘米处。 1.4.观察结果：在紫外光灯下，将两块薄层板相互比较观察。若第2块板的第2个点在B t标准点的相应处出现最低检出量，而第1块板则在与第2块板的相同位置上出现萤光，则样品中B，含量在5 Ppb以下。

5.双向展开法的回收率

　　在花生、花生油及玉米中加入B-水平为2.5及1.25ppb时，回收率约为80％或以上（附花生的展开样式图两张）。若为了提高原法的灵敏度（原法灵敏度为5 ppb）时，除改用双向展开外，还须注意所有的样品最 好均改用已烷、甲醇、水提取，最后加入苯：乙腈的体积为0.5毫升（即每毫升样液中含有8克样品）。若滴加20微升或40微升样液时，仍不出现兰紫色萤光，则其含量为2.5或1.25ppb以下。

6.黄曲霉毒素B1的确定方法

为了证实所得荧光确系黄曲毒毒素B1产生的，还须进行确证，即于薄层板的黄曲霉毒素B1点上滴加三氟醋酸后，使之产生黄曲霉毒素B1衍生物。确定方法如下：在薄层板上滴加以下三个点：第1个点为样液点，即加样液20微升（样液点中含有B，量至少为0.002微克以上，若样品中B1含量为25ppb，则取前述提取样液20微升即可达到0.002微克）；第2个点为样液加B-标准液点，即加与第一个相同的样液20微升后，在此点上再滴加B。标准液0.2微克／毫升或0.5微克／毫升10微升；第3个点为B-标准液点，即加0.2微克／毫升或0.5微克／毫升10微升。然后在各个点上均加上三氟醋酸一滴，滴点的大小只要能盖住第一次的滴加点，反应5分钟，用吹风机热风吹5分钟，使热风到板上的温度不要超过40℃再用丙酮：氯仿（10；90，V／V）展开剂展开至前沿距原点10厘米处，在紫外光灯下观察的方法如下：

       在B 1标准液点的量为0.002微克时，与三氟醋酸反应后，则主要产生一个蓝紫色荧光点，其Rf值为0.1左右；为0.005微克时，则产生两个蓝紫色荧光点，其Rf值一个为0.1左右，另一个则与同样条件下未加三氟醋酸展开的相同（即Rf值较高处有一个点），同时前者的荧光强度强于后者很多。

       若样液中所产生的衍生物反应完全与黄曲霉毒素B1相同，而且两者的荧光点完全重选。则确证所得的荧光是黄曲霉毒素B-产生的。

       为了确证上述结果，肯定样液中所产生的Rf值为0.1左右的荧光点确系反应后产生的，可以在作以上确证试验同时另作一块不加三氟醋酸的薄层板，加以肯定。

7.讨论

　　用以上原理测定黄曲霉毒素B的方法不是专一性的，因有的样品中其他物质亦可产生类似黄曲霉毒素B，的蓝紫色荧光点，而且两者的Rf值亦可相同。为了进一步确定，一般可以多用几种展开剂展开，除以上所用的丙酮：氯仿（6：94，V／V）展开剂以外，还可以用甲醇：氯仿（4：96，V／V）；乙 醚：甲醇：水（96：3：1，V／V／V），或苯：乙醇：水（46：35：19，V／V／V）@展开剂展开，以观察试验样液点与B，标准点在各种展开剂展开的情况下，两者的蓝紫色荧光点是否重选（假定样液为阳性的条件下）。若用某种展开剂展开时不一样，则可认为此样液中含有的蓝紫色荧光点不是黄曲霉毒素B0，若都一样则可以进一步用上述产生黄曲霉毒素B1衍生物的方法确定亦可以将阳性样品直接用此法确定。除以上外，还有用鸭雏或鸡胚等生物方法确定，或用紫外分光测定吸收曲线等方法确定。