牛奶中黄曲霉毒素M1检测方法(Copure® AFMM101

黄曲霉毒素M1的介绍

黄曲霉毒素M1属于黄曲霉毒素一类结构相似的化合物中的一种，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率Z高。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。黄曲霉毒素M1危害主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡。其毒性是的3倍、的20倍、敌敌畏的30倍，属特别剧毒物质，为强致癌剂。2002年被世界卫生组织列为I类致癌物。

有关黄曲霉毒素M1的食品安全限量规定

ZG、美国及日本对乳及乳制品黄曲霉毒素M1 限量标准均为0.500μg/kg，

欧盟为0.050μg/kg。

逗点生物开发出使用SPE方法检测牛奶中黄曲霉毒素M1的含量，平均回收率在95%，为客户提供关于黄曲霉毒素M1检测有效的解决方案。

实验目的  

本研究利用免疫亲和柱作为样品的前处理方法，HPLC作为分析方法，检测牛奶中黄曲霉毒素M1的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

实验目标物    

黄曲霉毒素M1(CAS:6795-23-9)

应用范围

本方法适用于牛奶中黄曲霉毒素M1检测HPLC检测及确证。

实验材料   

biocomma® Copure® AFMM101免疫亲和柱1 mL (Cat.No.COAFMM101)

实验方法

1．样品提取

称取50g牛奶到具塞离心管中，在水浴中加热到35-37℃。4000转离心15min，除去上层乳脂，剩余溶液全部过玻璃纤维滤纸，滤液待下一步过柱净化。

2．免疫亲和柱净化

(1)将10mL或者50mL注射器连接于免疫亲和柱上端。

(2)处理好的样品滤液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。

(3)加10mL水淋洗柱子两次，弃掉流出的液体。

(4)用真空泵抽干柱子中的水。

(5)加入4mL甲醇缓慢洗脱，流速约为2-3秒/滴。

(6)在40°下氮吹至近干，加10%乙腈水定容。过0.22um膜待上机。

3．HPLC条件  

设   备：岛津HPLC-30A

色谱柱 ：Inertsil®ODS-3 3um2.1×75mm

检测器 ：RF-20A 荧光检测器

检测波长：激发波长：430nm

 发射波长: 360 nm

流动相：A:乙腈   B:水

表1 等度洗脱条件

流速：0.3 mL/min   

进样体积:10 μL

实验结果

1、1ug/kg牛奶中黄曲霉毒素M1的添加回收结果

表2  1ug/kg牛奶中黄曲霉毒素的添加回收结果

2、添加水平为1 ug/kg牛奶中黄曲霉毒素M1的液相色谱图

图1  添加水平为1 ug/kg牛奶中黄曲霉毒素的液相色谱图

结论：本方法在牛奶中黄曲霉毒素M1检测的平均回收率是95.63%，RSD是2.46%。