鱼肉中甲砜霉素检测的固相萃取方法(Copure®C18)

甲砜霉素的介绍

甲砜霉素（Thiamphenicol），别名硫霉素，甲砜氯霉素。该品为白色结晶性粉末，无臭。在二甲基甲酰胺中易溶，在无水乙醇中略溶，在水中微溶。熔点 该品的熔点为163～167℃。甲砜霉素是氯霉素的同类物，KJ谱和KJ作用与氯霉素相仿，具广谱抗微生物作用，包括需氧革兰阴性菌及革兰阳性菌、厌氧菌、立克次体属、螺旋体和衣原体属。甲砜霉素对流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌具杀菌作用。

有关甲砜霉素的食品安全限量规定

GB 29689-2013 食品安全国家标准规定甲砜霉素Zda限量为0.05mg/kg.逗点生物开发出使用SPE方法检测鱼肉中甲砜霉素的含量，平均回收率在83.33%，为客户提供关于甲砜霉素检测有效的解决方案。

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测鱼肉甲砜霉素的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

甲砜霉素(CAS:15318-45-3)

三、应用范围

本方法适用于鱼肉中甲砜霉素检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料   

biocomma®Copure®C18固相萃取柱500 mg/6 mL (Cat. No. COC186500)  

五、实验方法

1、样品提取

取均质后鱼肉5.0 g（极ng确到0.01 g）到50 mL离心管，加6 g无水硫酸钠，再加10 mL乙腈，超声5 min，振荡5 min，于4000 r离心5 min取上清液8 mL到15 mL离心管，氮吹干。加5 mL水溶解，再加5 mL正己烷除脂，涡旋混匀，于4000 r离心3 min，上层有机相弃去，分层处正己烷用氮气吹干，下层待净化。

2、SPE柱活化

（1）活化：加5 mL甲醇活化， 5 mL水平衡，弃去流出液；

（2）上样和淋洗：加入待净化溶液，弃去流出液；再加10 mL水淋洗，弃去流出液，抽干小柱；

（3）洗脱：加入8 mL甲醇洗脱，收集流出液，氮气吹干。

(4)重新溶解：用1 mL 20%乙腈水溶解。经0.22 μm滤膜重新过滤，供GX液相色谱测定。 

3、HPLC条件  

设   备：Waters Alliance 2695

色谱柱：Ultimate® XB-C8( 250 mm×4.6 mm,5 μm)

检测器：Waters 2487 紫外检测器

检测波长：224 nm

流动相：A: 乙腈   B: 水

表1 等度洗脱条件

流速：1.0 mL/min   

进样体积:20 μL

六、实验结果

1、0.064mg/kg鱼肉中甲砜霉素的添加回收结果

表2  0.064 mg/kg鱼肉中甲砜霉素的添加回收结果

2、添加水平为0.064 mg/kg甲砜霉素检测的液相色谱图

图1  添加水平为0.064mg/kg甲砜霉素检测的液相色谱图 

结论：鱼肉中甲砜霉素检测的平均回收率是83.33%，RSD是2.71%，满足标准要求。