保健品中淫羊藿苷检测的固相萃取方法(Copure® PA)

淫羊藿苷的介绍

淫羊藿苷是淡黄色针状结晶粉末，它是小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿、朝鲜淫羊藿的干燥茎叶提取物。淫羊藿苷溶于水，乙醇、乙酸乙酯，不溶于醚、苯、氯仿。与三氯化铁反应呈绿色，盐酸镁粉反应呈橙红色。淫羊藿具有强心、降血压、抗心律失常、增加脑血流量、YJ、抗病毒、KY、降血脂、抗肿瘤等多种作用，具有较高的YY和保健价值。我国的淫羊藿资源具有天然优势，运用祖国传统医学经 验与现代科学技术相结合，在其有效成分、制剂工艺、药理作用和临床应用等方面进行深入的研究，淫羊藿有可能成为具有良好开发前景的增强免疫功能和免疫调节、抗骨质疏松、 ZL心脑血管疾病的药物，具有广阔的应用前景。

有关淫羊藿苷的食品安全限量规定

按照ZG药典2015版一部药材和饮片中，淫羊藿苷按干燥品计算，含总黄酮以淫羊藿苷（C33H40O15）计，不得少于5.0%。

一、实验目的  

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测保健品淫羊藿苷的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物     

淫羊藿苷(CAS:489-32-7)

三、应用范围

本方法适用于保健品中淫羊藿苷检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料   

biocomma®Copure® PA 固相萃取柱2000 mg/12 mL (Cat. No. PACR122)

五、实验方法

1、样品提取

试样经过粉碎过后，称取0.50 g（极ng确至0.01 g）置于50 mL离心管中，加入20 mL70%乙醇水，超声20 min，涡旋1 min，于4000 r离心2 min，上层清液全部转移到100 mL梨形瓶（注意残渣不要倒进梨形瓶中），再加10 mL70乙醇水，涡旋1 min，于4000 r离心2 min，合并上清液到梨形瓶中，在80°旋转蒸发仪中蒸干，加10 mL水溶解，待净化。

2、SPE柱活化

（1）干法上样：取待净化溶液，直接加入PA固相萃取柱，弃去流出液；

（2） 淋洗和洗脱：加10 mL 水洗淋洗两次，弃去淋洗液；抽干小柱；加30 mL甲醇洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速1mL/min） 到100 mL梨形瓶中。

(3)重新溶解：在80°旋转蒸发仪中蒸干洗脱液，用1 mL 甲醇溶液溶解。经0.22 μm滤膜重新过滤，供GX液相色谱测定。 

3、HPLC条件  

设   备：Waters Alliance 2695

色谱柱：Ultimate® XB-C8( 250 mm×4.6 mm,5 μm)

检测器：Waters 2487 紫外检测器

检测波长： 270 nm

流动相：A:乙腈   B: 水

表1 等度洗脱条件

流速：1.0 mL/min   

进样体积:20 μL

六、实验结果

1、5.0 mg/kg保健品中淫羊藿苷的添加回收结果

表2  5.0 mg/kg保健品中淫羊藿苷的添加回收结果

2、添加水平为5.0 mg/kg保健品中淫羊藿苷检测的液相色谱图

图1  添加水平为5.0 mg/kg保健品中淫羊藿苷检测的液相色谱图

结论：保健品中淫羊藿苷检测的平均回收率是103.65%，RSD是0.20%。