面霜中氢醌检测的固相萃取方法(Copure® PSA)

氢醌的介绍

氢醌一般是指对苯二酚，因其可通过络合作用YZ酪氨酸酶活性，调控黑素细胞代谢过程，使表皮内多巴反应阳性黑素细胞数量显著减少，从而产生可逆性的皮肤褪色，人们发现氢醌对皮肤有美白作用,由于其价廉易得,因此在祛斑漂白类化妆品中的应用越来越广泛。但是研究发现，氢醌在淡化肤色的同时也产生了许多副作用，由于其毒性、刺激性大，轻则导致皮肤瘙痒、过敏、红斑、灼伤等不良反应，如果大面积长期使用还将对人体器官、系统产生毒害作用，并引发外源性白斑病、褐黄病和白血病、肿瘤和心血管等疾病。

有关的食品安全限量规定

欧盟(EU)于2002年1月2日起禁止在化妆品中添加氢醌。ZG《化妆品卫生规范》（2007版）也将氢醌列为限用物质。氢醌用作人造指甲系统时，使用时浓度0.02%（《化妆品卫生规范》，2007年版）；氢醌用作染发剂原料时：Zda使用浓度为0.3%（卫生部关于印发《染发剂原料名单（试行）》的通知，卫监督发[2005]335号)。在美白、祛斑类化妆品中不允许添加氢醌。逗点生物开发出使用SPE方法检测面霜中氢醌的含量，平均回收率90%，为客户提供关于氢醌检测有效的解决方案。

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测面霜中氢醌的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

氢醌(CAS:123-31-9)

三、应用范围

本方法适用于面霜中氢醌检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料   

biocomma® Copure®PSA固相萃取柱1000 mg/6 mL (Cat. No. COPSA61000)

五、实验方法

1、样品提取

称取0.50 g试样（极ng确至0.01 g）置于50 mL离心管中，加入3 mL饱和NaCl溶液，5 mL提取液（甲基叔丁基醚：正己烷v：v=3:1），涡旋混匀，振荡提取5 min，4000 r离心5 min，收集上清液，再加5 mL提取液重复提取一次，合并上清液，将上清液定容到10 mL，取5 mL上清液，加入2.5 mL正己烷，混匀待净化。

2、SPE柱活化

(1)活化：加5 mL甲基叔丁基醚：正己烷v：v=1:1，弃去流出液；

(2)淋洗和洗脱：加入待净化液，弃去流出液；用2X2.5 mL正己烷淋洗，弃去流出液，抽干小柱；加入6 mL甲醇洗脱，收集流出液。（整个过程控制流速为1 mL/min）

(3)重新溶解：加1 mL 甲醇溶液溶解。经0.22 μm滤膜过滤，供GX液相色谱测定。

3、HPLC条件  

设   备：Waters Alliance 2695

色谱柱：Phenomenex  kinetex®C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)

检测器：Waters 紫外检测器

检测波长：280 nm

流动相：A:水   B:甲醇

表1 梯度洗脱条件

流速：0.8 mL/min  

进样体积:20 μL

六、实验结果

1、添加水平为10.0 mg/kg氢醌的添加回收结果

表2  10.0 mg/kg氢醌的添加回收结果

2、添加水平为10.0 mg/kg氢醌的液相色谱图

图1  添加水平为10.0mg/kg氢醌检测的液相色谱图

结论：面霜中氢醌检测检测的平均回收率是89.39%，RSD是3.13%，满足标准要求。