新品|UCF.ME®超低残留热敏UDG酶，防治污染必不可少

2023-06-14 00:00:00 17阅读次数

扫码分享

操作环境中的气溶胶污染是造成PCR结果假阳性最常见的因素，美国科学家Lindahl最早在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中发现了UDG酶（Uracil DNA Glycosylase，尿嘧啶DNA糖基化酶），UDG酶与dUTP搭配使用，可建立PCR防污染体系。

图1. dUTP/UDG酶防污染系统去除残留扩增污染物示意图

目前市售UDG酶主要包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源的普通UDG酶及嗜冷海洋细菌来源的热敏型UDG酶两种类型。普通UDG酶较为耐热，经95℃、10 min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA糖基化酶活性，可能存在对靶标含dU扩增产物的降解作用。此外，由于商业化分子酶主要采用工程菌株（如大肠杆菌等）进行重组表达，因此分子酶中会存在一定量的宿主基因组DNA残留。加上制备环境和人源等因素影响，分子酶制品中极易存在污染DNA。在病原体检测过程中，污染的DNA可能会淹没低丰度的靶标核酸或和靶标核酸一起被检出，从而影响结果的判读。

翌圣生物UCF.ME®超低残留分子酶解决方案

为解决病原检测背景菌干扰问题，翌圣已建立完善的UCF.ME®超低残留分子酶研发、生产平台。通过对物料、环境、工艺、过程、质量等多环节把控，目前可规模化提供用于RT-qPCR检测，NGS建库的全套高性能、超低残留分子酶原料，助力解决病原检测中的背景菌干扰，提高检测准确度。

图2. 翌圣超低残留分子酶研发、生产环节把控

翌圣生物UCF.ME®超低残留热敏UDG酶

翌圣UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL (Cat#14466ES)来源于嗜冷海洋细菌，是一款UCF.ME®超低残留热敏UDG酶。该产品的使用可避免常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用，同时防止分子酶中存在的背景菌造成PCR结果假阳性，因此在检测过程中引入UCF.ME®超低残留的热敏UDG酶，对于准确鉴别感染病原体，协助感染、传染病的临床诊断至关重要。

产品特点

UCF.ME®超低残留：E. coli基因组DNA残留＜0.1 copies/ 1 U；
核酸酶残留低：无核酸外切酶、切口酶、RNase残留；
消化能力强：0.05 U/T即可消化10⁵ copies/T dU-DNA产物；
热敏性好：50℃ 10 min，55℃ 5 min或95℃ 5min以上任意条件都可完全被灭活；
兼容RT-qPCR反应体系：在高投入量（2U/20μL反应体系）下对检测体系无影响。

性能展示

消化能力强

0.05 U/T即可消化10⁵ copies/T dU-DNA产物

图3：使用14466ES配制qPCR mix，同时以不含UDG酶的qPCR mix为对照组，用于10⁵ copies/T dU-DNA产物的消化和扩增。结果显示：在14466ES投入量达0.05U/T时能完全消化10⁵ copies/T dU-DNA产物。

热敏性好

50℃ 10 min，55℃ 5 min或95℃ 5min以上任意条件都可完全被灭活

图4：取14466ES分别在下述条件：50℃，10min；55℃，5min；55℃，10min；95℃，5min进行热灭活处理，使用不同条件下灭活处理的14466ES配制成qPCR mix，同时以不含UDG酶的qPCR mix为对照组，用于dU-DNA产物的消化和扩增。结果显示：经过50℃，10min；55℃，5min；55℃，10min；95℃，5min热灭活处理后的14466ES均失去消化能力。

兼容RT-qPCR反应体系

在高投入量（2U/T）下对检测体系无影响

图5：使用新冠ORF1ab和N基因两种引物探针搭配14466ES配制成RT-qPCR mix，同时以不含UDG酶的RT-qPCR mix为对照组，对新冠RNA模板参考品进行扩增，结果显示：当14466ES投入量为2U/20μL反应体系时，对RT-qPCR反应无抑制。

FAQ

问

UDG酶可以用于已存在的扩增产物气溶胶污染吗？

已存在的扩增产物气溶胶污染不含dU，此时UDG酶不能发挥作用。建议选取其他扩增区域，重新设计引物，并建立dUTP/UDG酶防污染系统，即可避免“未来”的气溶胶污染。

问

UDG酶用于RT-qPCR或RT-PCR体系时，会干扰逆转录实验吗？

可选用耐受性能良好的逆转录酶，如Hifair® V Reverse Transcriptase（Cat#11300ES）反应温度50-55℃，此时热敏UDG酶活性极低。

问

UDG酶会切割RNA吗？

不会。在生物体内，UDG酶在DNA修复过程中发挥重要作用。它可以修复dC脱氨基形成dU的突变，进而避免GC碱基对突变为AT碱基对的可能。

问

UDG酶反应Buffer是什么？

UDG酶可以在各类缓冲液中发挥作用，如常规的Taq酶Buffer、连接酶Buffer、酶切Buffer等。

问

UDG酶对DNA链的碱基个数有要求吗？

不能从6碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶。

UCF.ME®超低残留RT-qPCR系列分子酶原料清单

产品定位	产品名称	产品货号
防污染热敏UDG	UCF.ME^® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL	14466ES
热启动Taq酶	Hieff UCF.ME^® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	14314ES
逆转录酶	Hifair UCF.ME^® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	14608ES
鼠源RNase抑制剂	UCF.ME^® Murine RNase Inhibitor (40 U/μL)	14672ES