欧盟GMP附录1与清洁验证——旁线和在线分析方法如何有助于您的污染控制策略

欧盟GMP附录1与清洁验证

欧盟GMP附录1于2022年8月进行了修订，以反映药品监管和生产环境的变化，并满足作为污染控制策略（CCS）一部分加强工艺了解的需求。附录1对设备污染控制策略的关注围绕清洁计划展开。清洁验证分析方法的选择为通过实施过程分析技术（PAT）（如细菌内毒素、微生物限度、总有机碳TOC和电导率的旁线或在线检测）来提高对工艺过程的理解提供了一个机会。

清洁验证可能令人畏惧，尤其是在对各种污染源进行大量检测以及需要自信地做出会对生产时间和产品质量造成影响的决策时。然而，使用PAT进行清洁验证，工艺过程控制和理解得到增强，可进行实时决策，并且使分析检测变得更快、更简单。制药企业可以最 大程度地减少动手时间，减少QC队列中的实验室样品数量，并减少执行检测所需的分析人员培训量。旁线或在线方法可以更快地获得结果，延长设备的正常运行时间，并通过在整个过程中跟踪结果形成趋势来降低整体风险。

清洁验证分析方法

清洁验证分析方法通常分为两类：专属性分析方法或非专属性分析方法，并应解决各种形式的污染问题。

专属性方法与非专属性方法：

• 非专属性方法是稳健的污染控制策略的理想选择，因为这类方法能够监测各种污染源，而不仅仅是毒性最 强或最难清洁的化合物。这提供了绝 对清洁度的衡量标准。

• 专属性方法采用诸如高效液相色谱仪（HPLC）、紫外-可见分光光度计（UV-Vis）或质谱仪等仪器。专属性分析方法对特定污染物或化合物进行量化，如活性药物成分（API）或清洁剂，但它们在整个过程的理解和控制方面存在局限性。

污染类型：

 化学污染：

TOC和电导率检测为两种非专属性分析方法，常用于清洁验证和化学污染检测。这两种方法共同为清洁程序提供了过程控制和理解，因为碳和电导率检测可以捕获从API到洗涤剂以及任何潜在赋形剂的污染物。这两种方法还具有很强的通用性，这使得它们不仅能够在实验室中使用，还能以旁线和在线形式检测，从而可以实时放行设备并使设备重新投入生产。

Sievers® M9 TOC分析仪：可以同时检测TOC与电导率

 微生物污染：

细菌内毒素检测和生物负载检测也用于清洁验证，以检测微生物污染或生物膜。在清理周期中进行适当的消毒步骤后，评估残留物的细菌内毒素和生物负载在业内已被越来越多地采纳。

通过结合生物负载、细菌内毒素、TOC和电导率检测方法，可增强污染控制策略，并最 终减少设备停机时间

清洁验证旁线和在线监测

随着附录1的修订，促使人们采取行动以进行连续监测并加强对过程的理解，从而向PAT过渡，包括清洁验证旁线监测和在线监测。分散QC实验室检测项目有助于更清楚地了解生产过程。

 旁线（At-line）监测：

通过旁线检测，可以消除从生产车间到QC实验室进行样品检测的过渡时间，旁线检测是在清洁周期后利用便携式仪器在生产设备现场进行取样。消除在QC实验室进行检测的需求，避免与质量控制工作流程相关的延迟，最 终减少设备恢复生产的周转时间并优化整体正常运行时间。

TOC和电导率旁线检测允许进行擦拭取样和冲洗取样。如果已经在实验室建立了清洁验证的TOC方法，则很容易从实验室过渡到生产车间。

细菌内毒素和生物负载旁线检测需要易于使用的仪器，并且可以提供比传统方法更快的结果。许多传统方法，如用于生物负载检测的平板计数或用于细菌内毒素检测的96孔板测定，都存在人为误差风险，因为在传统的生物负载评估过程中，需要手动计数菌落，而细菌内毒素检测需要数百个手动移液步骤。这些方法受时间限制，生物负载通常需要数天甚至数周才能获得结果。

当采用快速微生物方法（RMM）对生物负载进行检测时，例如使用可以与平板计数关联的高通量流式细胞术，制药企业可以快速做出可行决策，并在一小时内获得结果。然而，只有某些快速微生物检测方法能与平板计数相关联，因此技术的选择对于确保在CCS中简化采用这些方法非常重要。

Sievers® Soleil快速微生物检测仪：45分钟内即可获得生物负载检测结果并已经证实与平板计数法有相关性

清洁验证取样模式比较

用于鲎试剂分析的向心微流体技术是一种更新的细菌内毒素检测的创新方法，避免了传统鲎试剂检测的痛点，并为内毒素的实时放行检测提供了途径。在Sievers® Eclipse细菌内毒素检测仪中采用的这项技术不容易出错，并大大减少了设置时间、获得结果的时间和动手时间。并且不需要训练有素的微生物学分析人员，使其可转移到生产车间进行。作为CCS的一部分，将向心微流体技术用于生产区域旁线检测或QC检测，可在生产过程中更早检测细菌内毒素。该技术还有助于减少所涉及的时间、业务风险以及生产过程的任何潜在风险。

Sievers® Eclipse细菌内毒素检测仪：使用向心微流体技术，鲎试剂的使用量减少90%，且可使用重组试剂

 在线（Online）监测：

在线清洁验证通过TOC和电导率在线检测来实现，并最 终能够加强过程理解、提高效率。TOC和电导率在线监测优于专属性分析方法，考虑到高效液相色谱仪（HPLC）、紫外-可见分光光度计（UV-Vis）或质谱仪等仪器的占地面积以及缺乏在线兼容性，因此需要在实验室中进行清洁验证。

Sievers® TOC和电导率分析仪可以集成到原位清洗设备CIP或原位清洗设备CIP的组件中，实现对最 终冲洗的在线、实时取样。除非另有说明，否则该方法通过旁线检测或实验室棉签样品检测来加以补充，但最 终基于TOC和电导率冲洗样品通过既定清洁验证限值，有条件地对设备实时放行，允许制药企业通过降低设备停机时间来优化正常运行时间。生产需要等待冲洗样品和棉签样品分析结果合格后才能使设备返回生产，这就使得在线检测为完全消除设备等待时间提供了可能。

结论

通过采用符合附件1准则的工艺分析技术进行清洁验证，可以降低风险。TOC、电导率、细菌内毒素和生物负载的快速检测方法可用于确保设备的清洁度，并提高对工艺的了解和控制。通过部署这些污染物的旁线或在线监测系统，您可以减少人工操作步骤，更快地检测到污染，并最 大限度地延长设备正常运行时间，避免生产延误。

如附录1所述，快速或替代方法和连续监测系统“应被考虑以加强产品保护，使其免受潜在的内毒素/热原、颗粒和微生物污染。”除旁线或在线TOC和电导率检测外，快速微生物方法（如用于细菌内毒素检测的微流体技术和用于生物负载检测的流式细胞术）的采纳和实施将有助于简化清洁验证过程并降低风险。这些方法通过评估和管理潜在的质量风险来做出可操作的决策和更好地管理设备，从而有助于污染控制策略。通过更快地获得检测结果和更容易地对过程进行监控，可以最 大程度地减少生产或产品放行延误，从而确保及时向患者提供安全、有效的治 疗。