从RNA到cDNA，翌圣生物Hifair®反转录5分钟系列产品快速出圈！
反转录是将RNA转录成互补DNA (cDNA) 的过程，该反应由反转录酶介导完成。在有退火引物的情况下，反转录酶首先与 RNA 模板结合。反转酶的RNA依赖性 DNA 聚合酶活性通过掺入反应混合物中的dNTP来合成cDNA，反应生成得到 cDNA:RNA 杂合链，此过程被称为第一链 cDNA 合成。
莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反转录酶是分子生物学实验流程中常见的反转录酶之一。为了获得更高的反转录效率、更好的热稳定性和更高的 cDNA 合成率，通常会对原始的反转录酶进行基因工程改造。目前市面上的反转录试剂所需要的反转录时间普遍从15分钟到30分钟不等，时间相对较长，当反应样本量较大时，整体花费时间量也会急剧上升。翌圣生物现有的5分钟反转录系列产品，在5分钟内即可完成反转录，省时高效。
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产品定位 |
产品名称 |
产品货号 |
| 快速高效高产反转录预混液 |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR |
11156ES |
| 快速高效高产反转录预混液(含gDNA去除)新星王牌 |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (DNA digester plus)Passion~ |
11155ES |
| 快速一步完成gDNA去除与反转录 |
Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR |
11151ES |
| 引物选择灵活的快速反转录试剂盒(含gDNA去除) |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) |
11150ES |
| 引物选择灵活的快速反转录试剂盒(含gDNA去除及示踪染料) |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit |
11149ES |
快速高效高产反转录预混液(含gDNA去除)(Cat #11155ES)
性能展示
| 模板 | 293T细胞 | 拟南芥 | 鼠肝 | 鱼肝 |
| 11155ES | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
| 品牌A | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
| 品牌B | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| 品牌C | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| 品牌D | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
图. 分别以人293T细胞RNA、拟南芥RNA、鼠肝RNA和鱼肝RNA为模板进行检测。品牌A、品牌B、品牌C及品牌D均为两步消化反转录试剂，反转录时间在15分钟-20分钟不等。测试结果显示，11155ES5分钟反转录结果优异，产量均优于其他品牌，Ct值更小。
5分钟一步消化&反转录预混液(Cat #11151ES)
性能展示
图. 以人293T细胞RNA为模板，分别检测三种基因。品牌A、品牌B、品牌C均为一步gDNA去除&反转录试剂。测试结果显示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反转录的产量均优于其他品牌，Ct值更小。
图. 以拟南芥RNA为模板，品牌A、品牌B、品牌C均为一步gDNA去除&反转录试剂。测试结果显示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反转录的产量均优于其他品牌，Ct值更小。
图. 以人293T细胞RNA为模板，扩增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分别投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA进行反转录并进行荧光定量检测。结果显示，11151ES可满足100 pg-1 μg RNA的反转录。
性能展示
灵敏度高，最低可至10 pg
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES进行反转录，得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示，RNA 投入量为10 pg-1 μg时，11149ES均可反转成功，保证定量结果。
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES进行反转录，将得到的cDNA进行PCR检测。结果显示，11149ES能够满足合成1 kb-14 kb长度的cDNA, 后续PCR有一定的适用场景。若需要直接反转出10kb以上的片段，建议延长反转录时间至20-30分钟，以保证最终片段的获取。
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RNA投入量 |
Ct值 |
|
|
11149ES |
进口A品牌 |
|
|
1 μg |
15.2 |
15.5 |
|
100 ng |
18.0 |
18.5 |
|
10 ng |
21 |
21.7 |
|
1 ng |
24.5 |
25.1 |
|
100 pg |
29.1 |
29.7 |
|
10 pg |
32.7 |
34.3 |
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES、进口A品牌进行反转录，其中11149ES不进行gDNA去除步骤，将得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示，进口A品牌反转时间为13分钟， 11149ES反转时间为5分钟，不同产物定量显示，11149ES的Ct更小或者接近进口竞品，说明11149ES 5分钟反转效率优于或近似进口A品牌的反转录效率。
|
RNA投入量 |
Ct值 |
|
|
11149ES |
进口B品牌 |
|
|
1 μg |
16.2 |
17.4 |
|
100 ng |
19.0 |
20.5 |
|
10 ng |
22 |
23.8 |
|
1 ng |
26 |
27.9 |
|
100 pg |
31.4 |
33.2 |
|
10 pg |
32.9 |
35.6 |
图. 以293T细胞总RNA为模板，使用11149ES、进口B品牌进行逆转录，其中11149ES不进行gDNA去除步骤，得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示，进口B品牌反转时间为20分钟，11149ES反转时间为5分钟，不同量底物定量显示，11149ES的Ct更小或者接近进口B品牌，说明11149ES 5分钟反转效率优于或近似进口B品牌的反转录效率。
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方法 |
分类 |
产品名称 |
货号 |
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RNA提取 |
同Trizol提取 |
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent |
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免氯仿升级版 |
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent(Tcm Free) |
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动物组织/细胞总RNA提取，避开有毒试剂，最快15 min完成 |
MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit细胞/组织总RNA提取试剂盒 |
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|
qPCR染料法 |
高特异通用型定量预混液(染料法) |
Hieff UNICON® advanced qPCR SYBR Master Mix |
11185ES |
|
高灵敏通用型定量预混液(染料法) |
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Master Mix |
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|
超高性价比定量预混液 (染料法)，已发文章累计IF达到5000+ |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) |
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Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox) |
|||
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Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) |
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反转录试剂 |
5 分钟一步消化&反转录预混液 |
Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR |
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|
5 分钟快速反转，最长可满足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游应用PCR/qPCR)-示踪版 |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit |
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|
5 分钟快速反转，最长可满足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游应用PCR/qPCR)-常规版 |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit（No Dye） |
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|
高质量第一链cDNA合成预混液，含gDNA去除(下游应用qPCR) |
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
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